Fordele og ulemper ved Multiphoton Laser Scanning Microscopy (MLSM)
Multifoton laser scanning mikroskopi er en eksperimentel metode baseret på laser scanning mikroskopi teknologi, som giver bedre optiske sektionsmuligheder til tredimensionel observation. Multi-foton fluorescens excitationsmetoden bruger rødt lys med lang bølgelængde eller nær-infrarødt lys til at indsamle højopløselige fluorescensbilleder af prøver, hvilket forårsager minimal skade på levende prøver. Derfor er den velegnet til billeddannelse af levende celler, især tykt levende væv såsom hjerneskiver, embryoner osv. Billeddannelsesundersøgelser af hele organer eller endda hele kroppe.
Fordelene er som følger:
1. Brug rødt lys eller infrarødt lys til at excitere, og lysspredningen er lille (spredningen af små partikler er omvendt proportional med bølgelængdens fjerde potens).
2. Der er ikke behov for nålehul, og flere spredte fotoner fra det billeddannende tværsnit kan opsamles.
3. Nålehullet kan ikke skelne spredte fotoner, der udsendes fra det ufokuserede område eller fokusområdet, og signal-til-støj-forholdet for multi-foton-billeddannelse i dybe lag er godt.
4. Det ultraviolette eller synlige lys, der bruges til excitation af en enkelt foton, absorberes og dæmpes let af prøven, før strålen når brændplanet, og det er vanskeligt at excitere dybe lag.
5. Med hensyn til biologisk mikroskopobservation er den første overvejelse ikke at beskadige selve organismens aktive tilstand og at opretholde strømmen af vand, ionkoncentration, oxygen og næringsstoffer. Ved lysobservation skal både varme- og fotonenergi holde sig inden for den bestrålingsmængde og lysenergi, at cellerne ikke bliver beskadiget.
6. Multifotonmikroskopi har også mange fordele. For eksempel med hensyn til tredimensionel opløsning, dybdegennemtrængning, spredningseffektivitet, baggrundslys, signal-til-støj-forhold, kontrol osv., er der transcendente egenskaber, som tidligere lasermikroskoper ikke havde eller ikke kunne matche.
Multi-foton konfokal laser scanningsmikroskopi er blevet udvidet til forskellige forsknings- og anvendelsesområder. Det kan udføre tredimensionel ikke-destruktiv observation af prøver i deres naturlige tilstand og kan forbedre opløsningen og signal-til-støj-forholdet i systemet. Brug af multi-foton excitationsmaterialer Ændringer i egenskaber kan også realisere tredimensionel højdedatalagring og tredimensionel mikrobearbejdning i enhver retning, som har høj anvendelsesværdi. Det menes, at med den videre udvikling af maskiner, materialer, laserteknologi osv. relateret til multi-foton konfokal mikroskopi, vil mere fotonisk konfokal laser scanning mikroskopi modtage større udvikling og bredere anvendelse.
Ulemperne er som følger:
1. Det kan kun afbilde fluorescens.
2. Hvis prøven indeholder kromoforer, der kan absorbere excitationslys, såsom pigmenter, kan prøven blive beskadiget af varme.
3. Opløsningen er en smule reduceret. Selvom det kan forbedres ved at bruge konfokale huller på samme tid, vil der være signaltab.
4. Begrænset af dyre ultrahurtige lasere er omkostningerne ved multifoton scanningsmikroskoper relativt høje.
