Biomikroskopi vedrørende volumen af vævsblokke
Biologisk mikroskopi Indtil videre er koldfiksering, frosset ultratyndt snit og frysetørring rutinemetoder til vævs- og cellerøntgenmikrosnit. Detaljerne i denne metode er forklaret som følger:
For biologiske mikroskoper med kondensator kan kondensatoren flyttes op og ned for at gøre lysstyrken moderat, og blænden på det variable lys kan også ændres for at opnå en moderat lysstyrke på 9b. Hvis lyset er solrigt, kan kondensatoren hæves passende op, og blænden på den variable lyskilde kan forstørres passende. Hvis lyset er for stærkt, kan kondensatorlinsen sænkes passende, og blænden på det krydsende lys kan reduceres passende. Hvis du stadig føler dig blændende i dette tilfælde, kan du vælge et passende filter og placere det på beslaget under kondensatoren. Denne eg vil være i stand til at opnå den lysstyrke, der tilfredsstiller dig. Selvfølgelig kræver justering af de øvre og nedre positioner af kondensatoren, justering af blændestørrelsen på den variable optiske aflæsning og valg af et passende filter en vis periode med øvelse for at få erfaring.
Et meget vigtigt emne i biologisk mikroskopi er, at i processen med prøveudtagning og adskillelse af celler, efter frysetørring og harpiksindlejring (FD), efter frysning af ultratynde aggregater og efter frysetørring, indholdet af 65 elementer i hver del skal håndteres omhyggeligt. De celler, der skal analyseres, kan ikke beskadiges. Fordi røntgenmikroanalyse ikke kun involverer mange trin, men også koster meget. Hvis de analyserede celler er beskadigede celler eller døde celler efter lang tids og flertrinsbearbejdning, er det meget beklageligt at drage forkerte konklusioner. For eksempel har kardiomyocytter adskilt ved kollagenasebehandling to former, den ene er lang stang
Biomikroskopi Mængden og fordelingen af elektrolytter i disse to typer celler er ret forskellige. Na er meget højt, og K er meget lavt i cirkulære kardiomyocytter, og koncentrationen af ca i nematoder er meget høj. Efter kontrol med andre analysemetoder er det bevist, at det høje Na og det lave K i runde celler og det høje Ca i mitokondrier skyldes beskadigelse af cellemembranen under celleadskillelsesprocessen. Den iskolde fikseringsmetode for celler og væv er normalt først at vedtage quenching og fiksering og derefter opbevare dem i flydende nitrogen. Slukningsfiksering er meget vigtig for effekten af konservering. Levende celler eller friske væv er rige på vand. Ved bratkøling bliver de dele af cellerne eller vævet, der er i direkte kontakt med det knuste kølemiddel (især ved bratkøling med flydende nitrogen), ofte frosset og fikseret først, hvorved der dannes en "skal", som hindrer de centrale dele af cellerne. knust og koldfikseret. Når man laver X-line mikroområdeanalyse, opdager man derfor ofte, at der er iskrystaller i midten af større celler. For at forhindre dette i at ske, bruges et stof med et smeltepunkt, der er højere end flydende nitrogen, men lavere end 806c, som et ødelagt kølemiddel. Der er mange sådanne stoffer, men den nemmeste at få, den billigste er koncentreret propan (kogepunkt - 42.120c, smeltepunkt - 187.10c, molekylvægt 44.1), og afkølingshastigheden er den hurtigste . Men dens ulempe er, at den er brandfarlig.
Biologisk mikroskop kan sætte muskelfiberen på et specielt stativ, så når muskelfiberkontraktionen når en bestemt fase og skal fikseres, startes straks dysen for at sprøjte flydende propan til muskelfiberen for at slukke og fikse den. Derefter blev muskelfibrene sammen med rammen taget ud og lagt i flydende nitrogen. Hvis du fikserer blodceller eller isolerede celler, skal du først koncentrere cellerne ved centrifugering ved lav hastighed, overføre cellerne til et sølvhætteglas med god termisk ledningsevne, placere hætteglasset i flydende propan og fryse til fiksering. Ved fiksering af rottebugspytkirtlen i Hall-laboratoriet blev de to stålblokke forkølet med flydende helium (eller flydende nitrogen), og de to kobberblokke blev fastspændt med pincet og placeret på forsiden og bagsiden af bugspytkirtlen for at slukke og fiksere. bugspytkirtlen. Væv eller celler kan opbevares i flydende nitrogen til langtidsopbevaring efter quenching og fiksering.
Biologisk mikroskopi Ud over den i øjeblikket mest respekterede frosne ultratynde snitmetode er her en anden deponeringsteknik, der bruges af videnskabsmænd. Et stof tilsættes for at danne et sediment med den komponent, der skal analyseres, for at immobilisere den før analyse, og sedimentet analyseres derefter. For eksempel bruger folk ofte oxalat og pyroantimonat til at afsætte ca i muskelceller. Førstnævnte er ikke følsom nok over for den lave koncentration af Ca i cytoplasmaet; pyroantimonat er mere følsomt og kan danne elektrontætte aflejringer med frit Ca i hjernen, men pyroantimonat er ikke foreneligt med natrium, mangan, barium, jern Der dannes også aflejringer og er mindre specifikke. Prøveforberedelsesprocessen ligner fremstillingen af almindelige transmissionselektronmikroskopprøver med ultratynde snit, forskellen er, at 3 procent kaliumpyroantimonat (phosphatbuffer saltvand, pH 7,6) blev fikseret i 6 timer før fiksering, og på de farvede muskel ultratynde snit, Sorte aflejringer blev set i midterlinjerne af bånd A og 2 af hver sarkomer, og ufarvede snit blev brugt til røntgenmikroanalyse. Diaminobenzidintetrahydrochlorid (DAB) blev brugt til at udfælde hæmholdige stoffer og så videre. Kombinationen af histokemisk udfældningsreaktion og røntgenmikrodifferentieringsbro kan overvejes i laboratorier, der ikke har frosne ultratynde snitforhold. Semi-kvantitativ kan udføres i henhold til tophøjden af de elementer, der skal analyseres
