Beskriv i detaljer udvælgelsestrinene og metoderne for fluorescerende prober til konfokal mikroskopi
I eksperimenter med konfokale mikroskoper kan nogle eksperimentelle indikatorer påvises ved hjælp af selve prøvens autofluorescens eller eksogene stoffer, men de fleste af de stoffer, der skal testes, har ikke målbar fluorescens og skal mærkes med fluorescerende prober. Den har et målbart fluorescerende signal. Så hvordan vælger man fluorescerende prober til konfokal mikroskopi?
1. Bestem de indikatorer, der skal testes i henhold til formålet med forsøget
Når først detektionsindekset er bestemt, bestemmes også selektionsområdet for fluorescerende prober. Det ses, at valget af hvilken fluorescerende probe der skal bruges i forsøget er bestemt af formålet med forsøget. Hvis formålet med forsøget for eksempel er at studere ændringerne af calciumioner i kardiomyocytter, når der opstår atrieflimren, kan det fastslås, at stoffet, der skal testes, er calciumioner i kardiomyocytter, og selektionsområdet af fluorescerende prober er begrænset til calciumionprober, der kan mærke levende celler. Nål.
2. Bestem rækkevidden af tilgængelige fluorescerende prober
For nye eksperimentelle stoffer eller indikatorer, hvis formålet med forsøget ikke er at udforske nye fluorescerende prober, kan du vælge at anvende modne prober og mærkningsmetoder. Typen eller rækken af fluorescerende prober, der kan mærke det stof, der skal testes, kan bestemmes ved at søge i autoritativ litteratur eller produktkataloger fra velkendte reagensfirmaer i ind- og udland.
3. Undersøg om fluorescerende sondes egenskaber opfylder kravene til klargøring af fluorescerende prøver
Karakteristikaene af fluorescerende prober påvirker direkte mærkningen af prøver og de eksperimentelle resultater. Derfor, før du vælger fluorescerende prober og mærker prøver i eksperimentet, er det nødvendigt fuldt ud at forstå deres fluorescensegenskaber. Karakteristikaene ved fluorescerende prober, der skal undersøges, omfatter:
1. Reaktionskarakteristika for lysprober og prøver
2. Følsomhed og fluorescensintensitet af fluorescerende prober
3. Spektralegenskaber af prøver mærket med fluorescerende prober
4. Stabilitet af fluorescens
5. Interaktion mellem multipel fluorescens i prøven
