Bestemmelse af mikrobiel population - direkte mikroskopisk tællemetode!
I. Formålskrav
1, For at præcisere princippet om hæmatokritpladetælling.
2, Behersk metoden til mikrobiel tælling ved hjælp af hæmatokritplade.
II. Grundlæggende principper
Mikroskop direkte tællemetode er en lille mængde suspension af prøven, der skal testes på et specielt objektglas med et defineret areal og volumen (også kendt som den bakteriologiske tæller), i mikroskopet direkte tælle en enkel, hurtig, intuitiv metode. På nuværende tidspunkt er indenlandske og udenlandske almindeligt anvendte bakteriologiske tællere: blodcelletællerplade, Peteroff-Hauser bakteriologiske tællere og Hawksley bakteriologiske tællere osv., som kan bruges til gær, bakterier, skimmelsporer og andre suspensioner af tælling, det grundlæggende princip er den samme. De to sidstnævnte typer tællere har et samlet volumen på 0.02mm3 efter at dækglasset er lagt på, og afstanden mellem dækglasset og bæreskiven er kun 0,02mm, så mindre celler som f.eks. bakterier kan observeres og tælles med et olienedsænkningsobjektiv. Ud over brugen af disse tællere findes der også en estimeringsmetode for forholdet mellem udstrygningsareal og synsfeltområde observeret direkte under mikroskopet, som generelt bruges til bakteriologisk undersøgelse af komælk. Fordelene ved den direkte mikroskoptællingsmetode er intuitiv, hurtig og nem at betjene. Ulempen ved denne metode er dog, at resultatet normalt er summen af døde og levende organismer. Der er nogle metoder til at overvinde denne ulempe, såsom kombinationen af levende bakterier farvet mikrokammerkultur (kort tid) og tilsætning af cytokinesis inhibitorer for at opnå formålet med kun at tælle levende organismer.
Driftstrin
1, forberedelse af bakteriesuspension
Brug sterilt saltvand til at lave bakteriesuspension af ølgær med passende koncentration.
2, Spejltællerkammer
Inden der tilføjes prøver, skal tællekammeret på tællepladen inspiceres først. Hvis der er snavs, skal det renses og blæses tørt, inden der tælles.
3, Tilføjelse af prøver
Rens og tør blodcelletællerplade dækket med et dækglas, og brug derefter en steril kapillærburette til at ryste ølgærsuspensionen fra kanten af dækglasset for at tabe en lille dråbe, så bakterievæsken langs mellemrummet ved kapillær penetrering i tællekammer automatisk, generelt kan tællekammer fyldes med bakteriel væske. Når der tages prøver, skal bakterieopløsningen rystes godt først; ved tilsætning af prøver bør tællekammeret ikke have luftbobler.
4, Mikroskoptælling
Efter tilsætning af prøven, lad den hvile i 5 minutter, sæt derefter blodcelle-tællepladen på mikroskop-bærebordet, find først placeringen af tællekammeret med lav forstørrelse, og skift det derefter til høj forstørrelse til optælling. Juster intensiteten af lyset i mikroskopet passende, for mikroskopet med et reflektorlys bør også være opmærksom på, at lyset ikke bør være forspændt til den ene side, ellers er synsfeltet ikke let at tungenrydde tællekammerets gitterlinje, eller kun se den lodrette linje eller kun se den vandrette linje. Hvis bakterievæsken viser sig at være for tyk eller for tynd før tælling, er det nødvendigt at justere fortyndingen igen før tælling. Generelle prøvefortyndingskrav på ca. 5 til 10 bakterier i hver celle er passende. For hvert tællekammer udvælges organismerne i 5 midterrum (4 hjørner og et midterrum i midten) til tælling. Organismerne placeret på gitterlinjerne tælles normalt kun på de øverste og højre linjer. I tilfælde af gærknopper, når den spirende krop når halvdelen af modercellens størrelse, tælles den som to organismer. Tælling af en prøve fra de to tællekamre i gennemsnitsværdien for at beregne bakterieindholdet i prøven.
5. Rengøring af hæmatokritpladen
Efter brug skal du skylle blodlegemetællerpladen med vand under vandhanen, brug ikke hårde genstande til at vaske og børste, tør den selv eller brug en hårtørrer til at føntørre den efter vask. Undersøg mikroskopisk pladen for at se, om der er rester af organismer eller andre udfældninger i hvert rum. Hvis den ikke er ren, skal vasken gentages, indtil den er ren.
