Bestemmelse af antallet af mikroorganismer-Mikroskopisk direkte tællemetode!
Bakteriepopulationsvækst manifesteres ved en stigning i celleantal eller en stigning i cellulært materiale. Metoder til bestemmelse af antallet af celler omfatter direkte mikroskopisk tælling, pladetælling, turbiditetsvurdering med spektrofotometer, mest sandsynligt antal MPN og membranfiltrering. (membranfiltrering) etc. Metoder til måling af cellulære stoffer omfatter bestemmelse af celletørvægt, bestemmelse af visse cellekomponenter såsom nitrogenindhold, RNA- og DNA-indhold og bestemmelse af metabolitprodukter. Kort sagt er der mange metoder til at måle mikrobiel vækst, hver med sine egne fordele og ulemper. Metoden bør vælges i henhold til de specifikke krav til arbejdet. Dette eksperiment introducerer hovedsageligt mikroskopets direkte tællemetode, som er almindeligt anvendt i produktion og videnskabeligt forskningsarbejde.
1. Formålskrav
1. Afklar princippet om tælle med en blodcelletælleplade.
2. Mestre metoden til at tælle mikroorganismer ved hjælp af et blodcelle tællebræt.
2. Grundlæggende principper
Mikroskop direkte tællemetode er en enkel, hurtig og intuitiv metode, der placerer en lille mængde suspension af prøven, der skal testes, på et specielt objektglas med et bestemt areal og volumen (også kaldet et bakteriometer) og tæller det direkte under et mikroskop. Metoder. I øjeblikket omfatter almindeligt anvendte bakteriometre i ind- og udland: hæmocytometer, Peteroff-Hauser bakteriometer og Hawksley bakteriometer osv. De kan alle bruges til at tælle gær, bakterier, skimmelsporer og andre suspensioner, og de grundlæggende principper er de samme. De to sidstnævnte bakterietællere har et samlet volumen på 0.02 mm3 efter at være blevet dækket med et dækglas, og afstanden mellem dækglasset og objektglasset er kun 0,02 mm. Derfor kan en olie-immersionsobjektivlinse bruges til at observere og detektere mindre celler såsom bakterier. tælle. Ud over at bruge disse bakteriometre er der også en estimeringsmetode, der direkte observerer forholdet mellem udstrygningsarealet og synsfeltområdet under et mikroskop. Denne metode bruges generelt til bakteriologisk undersøgelse af mælk. Fordelene ved mikroskopets direkte tællemetode er, at den er intuitiv, hurtig og nem at betjene. Ulempen ved denne metode er dog, at det målte resultat normalt er summen af døde bakterier og levende bakterier. Der er i øjeblikket nogle metoder til at overvinde denne mangel, såsom at kombinere levedygtige bakterier farvning af mikrokammerkultur (kort tid) og tilføje celledelingshæmmere for at opnå formålet med kun at tælle levedygtige bakterier.
Dette eksperiment bruger et hæmocytometer som et eksempel til at udføre direkte tælling under et mikroskop. For brug af de to andre bakteriometre henvises til instruktionerne fra hver producent. Direkte optælling under et mikroskop ved hjælp af et hæmocytometer er en almindeligt anvendt mikrobiel optællingsmetode. Tællebrættet er en speciel rutsjebane med fire riller, der danner tre platforme; den bredere platform i midten er delt i to halvdele af en kort vandret rille, og der er et gittergitter på hver side af platformen. Hvert firkantet gitter er opdelt i ni store felter, og den store firkant i midten er tællerummet. Strukturen af blodcelletællepladen er vist i figur {{0}}. Der er generelt to specifikationer for tællekammerets skala. Den ene er en stor firkant opdelt i 25 mellemstore firkanter, og hver mellemstor firkant er opdelt i 16 små firkanter (Figur 15-2); den anden er en stor firkant. Det firkantede gitter er opdelt i 16 mellemstore firkanter, og hver mellemstor firkant er opdelt i 25 små firkanter. Men uanset hvilken slags tællebræt det er, er der 400 små firkanter i hver stor firkant. Sidelængden af hver stor firkant er lmm, så er arealet af hver stor firkant lmm2. Efter at dækglasset er dækket, er højden mellem dækglasset og objektglasset 0,lmm, så volumenet af tællekammeret er 0,lmm3 (en ti tusindedel af en milliliter). Figur 15-1 Blodcelletællepladens opbygning (1) Figur 15-2 Blodcelletællepladens opbygning (2) A. Set forfra; B. Længdesnit; forstørret firkantet gitter, den store firkant i midten er tællekammeret 1. Blodceller Tælletavle; 2. Dækglas; 3. Når du tæller i tællekammeret, skal du normalt tælle det samlede antal bakterier i fem kvadrater, derefter finde gennemsnitsværdien af hver kvadrat, og derefter gange med 25 eller 16 for at få Det samlede antal bakterier i et stort kvadrat omregnes derefter ind i det samlede antal bakterier i 1 ml bakterieopløsning. Antag, at det samlede antal bakterier i de fem midterste firkanter er A, og fortyndingsfaktoren for bakterieopløsningen er B. Hvis det er en tælleplade med 25 midterste firkanter, så er det samlede antal bakterier i 1mL af bakterieopløsningen {{ 23}} A/5×25×104× B=50000A·B (stykker) På samme måde, hvis det er en tælleplade med 16 kvadrater, er det samlede antal bakterier i 1mL bakterieopløsning {{ 30}}A/5×16×104×B=32000A·B (stykker),,
