Forskelle og fordele og ulemper mellem transmissionsfluorescensmikroskopi og refleksionsfluorescensmikroskopi
1. Transmissionsfluorescensmikroskop: Excitationslyskilden transmitteres gennem prøvematerialet gennem en kondensator for at excitere fluorescens. Almindeligt anvendte mørkefeltskoncentratorer eller almindelige koncentratorer kan bruges til at justere reflektoren for at konvertere excitationslys og sidelys til prøven. Dette er et relativt gammeldags fluorescensmikroskop. Dens fordel er stærk fluorescens ved lav forstørrelse, mens dens ulempe er, at dens fluorescens svækkes med stigende forstørrelse. Derfor er det bedre at observere større prøvematerialer.
2. Faldende stråle fluorescensmikroskop: Dette er en ny type fluorescensmikroskop, der har udviklet sig i moderne tid. I modsætning til den foregående falder excitationslyset ned fra objektivlinsen på overfladen af prøven ved at bruge den samme objektivlinse som belysningskondensatoren og objektivlinsen til at opsamle fluorescens. En dobbeltfarvet stråleseparator skal tilføjes til den optiske vej, som danner en 45 graders vinkel med fotouran. Excitationslyset reflekteres ind i objektivlinsen og samler sig på prøven. Fluorescensen, der genereres af prøven, og excitationslyset, der reflekteres fra overfladen af objektivlinsen og dækglasset, går samtidigt ind i objektivlinsen og vender tilbage til den dobbelte farvestråleseparator, hvorved excitationslyset og fluorescensen adskilles. Det resterende excitationslys absorberes derefter af blokeringsfilteret. Hvis der anvendes forskellige kombinationer af excitationsfiltre, dobbeltfarvede stråleseparatorer og blokeringsfiltre, kan de opfylde behovene for forskellige fluorescerende reaktionsprodukter. Fordelene ved dette fluorescerende mikroskop er ensartet synsfeltbelysning, klar billeddannelse og stærkere fluorescens med højere forstørrelse.
Fordele og ulemper ved transmissionsfluorescensmikroskopi
Lyskilde: Højtrykskviksølvlampe eller halogenlampe.
Spotlight spejl: Brug af en mørk felt spotlight til at adskille excitation og fluorescens.
Objektivlinse: Enhver type objektivlinse kan bruges.
Prøve: Tynde prøver er mere egnede til transmissionsobservation.
Fordele: ① På grund af brugen af en mørk feltkondensator kan excitationslyset ikke trænge ind i objektivlinsen, hvilket gør det nemt at danne en mørk baggrund og opnå god kontrast, og enhver objektivlinse kan bruges til observation. ② Når du bruger et objektiv med lav forstørrelse, er det lysere end et reflekterende fluorescensmikroskop.
Ulempe: Spotlightens centrum og højde skal justeres korrekt, ellers kan der ikke opnås et lyst fluorescerende billede. På grund af begrænsningen af brændvidden af det mørke felt spotlight kan tykke glasobjektglas ikke bruges. Belysningsområdet i synsfeltet bør ikke være for stort, ellers kan det få den fluorescerende prøves fluorescensfarve til at falme. Tykke eller uigennemsigtige prøver er ikke egnede.
Fordelene og ulemperne ved reflekterende fluorescensmikroskopi
Lyskilde: Højtrykskviksølvlampe eller halogenlampe.
Fokuseringslinse: Da objektivlinsen fungerer som en fokuseringslinse, er der ikke behov for en fokuseringslinse.
Objektivlinse: Den anvendte objektivlinse skal være i stand til at transmittere tilstrækkeligt ultraviolet lys og ikke selv producere fluorescens uden begrænsning på numerisk blænde.
Prøve: Både tykke og uigennemsigtige prøver kan observeres.
Fordele: ① Da objektivlinsen også fungerer som spotlight, kræver den ikke meget justering. ② Ved at bruge Kolar-belysningsmetoden kan virkningerne af blænde- og synsfeltblænder udnyttes. Den numeriske blænde på objektivlinsen er ikke begrænset, og billeder i høj opløsning kan også opnås ved høj forstørrelse Tykke eller uigennemsigtige prøver kan også observeret, og tykke dækglas kan også bruges Andre observationsmetoder kan også kombineres med reflekteret fluorescens, især med faseforskelmetode og transmissionsdifferensinterferensmetode. Det kan undgå unødvendigt fluorescensfarvefading-fænomen.
Ulempe: Ved brug af et jordforstørrelsesobjektiv er billedet relativt mørkt, så et objektiv med høj numerisk blændeåbning skal bruges. Filtersystemet skal effektivt adskille excitationsluminescens og fluorescens.,
