Udvidelse af fordelene ved multiphoton -laserskanningsmikroskopi til at omfatte
Laserskanning multiphotonmikroskop er en signifikant forbedring af optisk mikroskopi, hovedsageligt manifesteret i evnen til at observere dybe strukturer af levende celler, faste celler og væv og opnå klare og skarpe flerlags Z-planstrukturer, nemlig optiske skiver, som kan bruges til at konstruere tre-dimensionelle faste strukturer af prøve. Konfokalt mikroskop bruger en laserlyskilde, der udvides til at fylde hele fokusplanet for den objektive linse og derefter konvergeres til meget små punkter på fokalplanet for prøven gennem objektivets objektiv linse. I henhold til den numeriske åbning af den objektive linse er diameteren af det lyse belysningspunkt omkring 0. 25-0. 8 μ m, og dybden er omkring 0. 5-1. 5 μ m. Størrelsen på det konfokale punkt bestemmes af mikroskopdesignet, laserbølgelængde, objektive egenskaber, scanningsenhedstilstandsindstillinger og eksemplaregenskaber. Belysningsområdet og dybden af et feltmikroskop er stort, mens belysningen af et konfokalt mikroskop er fokuseret på et fokuspunkt på fokusplanet. Den grundlæggende fordel ved konfokal mikroskopi er, at den kan udføre fin optisk snit på tykke fluorescerende prøver (op til 5 0 μ m eller mere) med en tykkelse på ca. 0,5 til 1,5 μ m. Serien med optiske skivebilleder kan opnås ved at bevæge prøven op og ned ved hjælp af z-akse-steppermotoren på mikroskopet. Indsamlingen af billedoplysninger styres i * * -planet uden interferens fra signaler, der udsendes fra andre positioner på prøven. Efter at have fjernet påvirkningen af baggrundsfluorescens og forøgelse af signal-til-støjforholdet forbedres kontrasten og opløsningen af konfokale billeder markant sammenlignet med traditionelle feltbelysningsfluorescensbilleder. I mange prøver, komplicerede strukturelle komponenter sammen for at danne komplekse systemer, men når der når nok optiske sektioner kan indsamles, kan vi bruge software til at rekonstruere dem i tre dimensioner. Denne eksperimentelle metode er blevet vidt anvendt i biologisk forskning til at belyse de komplekse strukturelle og funktionelle forhold mellem celler eller væv.
