Eksperimentelle principper for mikrobiel mikroskopi direkte tællemetode
Direkte tælling under et mikroskop ved hjælp af et hæmocytometer er en almindeligt anvendt metode til at tælle mikroorganismer. Fordelen ved denne metode er, at den er intuitiv og hurtig. Anbring den passende fortyndede bakteriesuspension (eller sporesuspension) i tællekammeret mellem objektglasset og dækglasset på hæmocytometeret, og tæl under et mikroskop. Da volumenet af tællekammeret er fast (0,1 mm2), kan det konverteres til det samlede antal mikroorganismer pr. volumenenhed baseret på antallet af mikroorganismer observeret under mikroskopet. Da denne metode tæller det samlede antal levende og døde bakterier, kaldes den også for den samlede bakterietællingsmetode.
Et hæmocytometer er normalt et specielt objektglas med fire slidser, der danner tre platforme. Den midterste platform er opdelt i to halvdele af en kort vandret rille. Der er et firkantet gitter indgraveret på platformen på hver side. Hvert firkantet gitter er opdelt i ni store firkanter. Den store firkant i midten er tællesalen. Optællingen af mikroorganismer foregår i tællekammeret. Strukturen af hæmocytometeret er vist i figur Ⅷ-1.
Tællekammerets målestok har generelt to specifikationer. Den ene er en stor firkant opdelt i 16 mellemstore firkanter, og hver mellemstor firkant er opdelt i 25 små firkanter (Figur Ⅷ-2); den anden er en stor firkant. Det firkantede gitter er opdelt i 25 mellemstore firkanter, og hver mellemstor firkant er opdelt i 16 små firkanter (Figur VIII-1, C). Men uanset hvilken slags tællebræt det er, er antallet af små firkanter i hver stor firkant det samme, det vil sige 16×25=400 små firkanter, som vist i figur Ⅷ-2.
Sidelængden af hver stor firkant er 1 mm, så arealet af hver stor firkant er 1 mm2. Når dækglasset er dækket, er højden mellem objektglasset og dækglasset 0,1 mm, så volumenet af tællekammeret er 0,1 mm3.
Når du tæller, skal du normalt tælle det samlede antal bakterier i fem mellemstore kvadrater, derefter finde gennemsnitsværdien af hvert midterste kvadrat, og derefter gange med 16 eller 25 for at få det samlede antal bakterier i et stort kvadrat, og derefter beregne Omregn til det samlede antal bakterier i 1 ml bakterieopløsning.
