Fluorescensmikroskop og almindeligt optisk mikroskop forskelle og karakteristika
Fluorescensmikroskop og almindeligt optisk mikroskop er anderledes, det er ikke gennem belysning af den almindelige lyskilde at observere prøven, men brugen af en vis bølgelængde af lys (normalt ultraviolet, blåviolet lys) excitation af fluorescerende materiale i prøven under mikroskopet, således at fluorescensen af fluorescensmikroskopets lyskilde ikke spiller en direkte belysning, men som en slags excitation af fluorescerende materiale inde i prøven af energikilden. Grunden til, at vi kan observere prøven, skyldes ikke belysningen af lyskilden, men fluorescensfænomenet præsenteret af det fluorescerende materiale i prøven efter at have absorberet lysenergien fra excitation. Det kan ses, at fluorescensmikroskopets egenskaber, hovedsagelig dets lyskilde, kan levere et stort antal specifikke bølgelængdeområder for excitationslyset, således at det fluorescerende materiale i den undersøgte prøve kan opnå den nødvendige intensitet af excitationslyset. Samtidig skal fluorescensmikroskopet have et tilsvarende filtersystem. Fluorescensmikroskopet er det grundlæggende værktøj til fluorescenshistokemi. Det er sammensat af ultrahøjtrykslyskilde, filtersystem (herunder excitations- og undertrykkelsesfilterplade), optisk system og fotografisk system og andre hovedkomponenter, er brugen af en vis bølgelængde af lys til at stimulere prøven til at udsende fluorescens.
1. måden af fluorescens excitation: ifølge bølgelængdeområdet for lys er opdelt i UV excitationsmetode (ved hjælp af ultraviolet belysning) og BV excitationsmetode (ved hjælp af blåt violet lys) to slags UV excitationsmetode er kortere end 400nm nær ultraviolet lys for excitation. Der er intet synligt excitationslys i denne metode, så den observerede fluorescens viser farvestoffets iboende fluorescens, og det er let at skelne den specifikke fluorescens på prøven fra selvfluorescensen af baggrundsvævet.
2. BV excitationsmetode: Metoden er centreret om 404nm, 434nm fra ultraviolet til blåt lys til excitation. Denne metode bruger blåt lys til at bestråle prøven, så afskæringsfilteret i fluorescensobservationssystemet skal bruge et filter, der fuldstændigt kan blokere det blå lys og tilstrækkeligt kan passere den ønskede grønne og gule fluorescens. Fluorescerende pigmenter til fluorescerende antistofmetoden. Da bølgelængden af den maksimale absorption af excitationslyset og bølgelængden af den maksimale emission af fluorescensen er tæt på hinanden, skal filtrene, der anvendes i BV-excitationsmetoden, være skarpe afskæringsfiltre. Denne metode bruger blåt lys som excitationslys, så fluorokromets absorptionseffektivitet er højere, og et lysere billede kan opnås. Ulempen er, at fluorescens under 500 nm ikke kan ses, og over 500 nm fremstår hele billedet gult. I den fluorescerende antistofmetode bedømmes det meste af specificiteten af den unikke farve af fluorochromet, så ulemperne ved BV-excitationsmetoden beskrevet ovenfor har en tendens til at være ekstremt indflydelsesrig, når man diskuterer subtil specificitet.
