Fluorescensmikroskop bruger metoder og forholdsregler
Brugsmetode:
(1) Anbring materialearket på bærebordet.
(2) Tænd for fluorescensmikroskopets spændingsregulator. Tryk derefter på startgruppen for at tænde. UV-lampen skal ikke slukkes i 15 minutter og skal ikke genstartes i 3 minutter efter at den er slukket.
(3) Drej excitationsfilteret til v, dikroisk film til v, vælg 495 eller 475nm blokeringsfilter.
(4) Vælg uvFL40, uvFL100 fluorescensmodtagende objektivlinsemikroskopi.
(5) Tilføj ikke-fluorescerende olie på objektglasset, først 40 x og derefter 100 x fokusmikroskopi. Vis fluorescens.
(7) Fordi det fluorescerende materiale ved ultraviolet bestråling med væksten af fluorescens gradvist svækket over tid, så den mikroskopiske undersøgelse bør ofte ændre synsfeltet.
(8) kan også bruge uvFL10 eller uvFL20 mikroskopimateriale med lav forstørrelse (med lav forstørrelse uden tilsætning af ikke-fluorescerende olie).
Fluorescensbilledoptagelsesmetode:
Fluorescensbillede set med fluorescensmikroskop, det ene er med morfologiske karakteristika, det andet er med farven og lysstyrken af fluorescens, ved bedømmelse af resultaterne skal de to kombineres med en omfattende bedømmelse. Resultaterne registreres i henhold til subjektive indikatorer, dvs. ved visuel observation af arbejderen. Som en generel kvalitativ observation, grundlæggende pålidelig. Med udviklingen af teknologi og videnskab, i varierende grad, brugen af objektive indikatorer til at registrere resultaterne af dommen, såsom brugen af cellespektrofotometer, billedanalysator og andre instrumenter. De resultater, der registreres af disse instrumenter, skal dog også kombineres med subjektiv bedømmelse.
Fluorescensmikroskopfotograferingsteknologi er meget nødvendig for at optage fluorescensbilleder, fordi fluorescens er let at falme og svække, for øjeblikkeligt at registrere resultaterne af fotografering. Metoden er grundlæggende den samme som almindelig mikrografi. Du skal blot bruge højhastigheds fotografisk film som ASA200 ovenfor eller 24. ovenfor. Fordi det ultraviolette lys på fluorescens burst effekt, såsom FITC markører, i ultraviolet lys bestråling 30s, fluorescens lysstyrke reduceret med 50%. Derfor er eksponeringshastigheden for langsom til at fange fluorescensbilledet. Generelle forskningsfluorescensmikroskoper har semi-automatiske eller fuldautomatiske mikrofotografisystemer.
Forholdsregler:
(1) Arbejd i nøje overensstemmelse med kravene i fluorescensmikroskopets fabriksmanual, skift ikke proceduren vilkårligt.
(2) Eftersynet skal udføres i mørkerummet. Når du er kommet ind i mørkerummet, skal du tilslutte strømforsyningen, tænde ultrahøjtryks-kviksølvlampen i 5-15min., vente til lyskilden udsender et stærkt lys for at stabilisere sig, og øjnene er fuldstændig tilpasset mørkerummet, og begynd derefter at observere prøven.
(3) For at forhindre skader på øjnene fra ultraviolet lys, bør der bæres beskyttelsesbriller, når lyskilden justeres.
(4) kontrollere den tid, hver gang til 1 ~ 2h er passende, mere end 90min, ultra-høj-tryk kviksølv lampe lysstyrke gradvist faldet, fluorescens svækket; prøver bestrålet med ultraviolet lys 3 ~ 5min, fluorescens er også væsentligt svækket; derfor må * ikke være mere end 2 ~ 3 timer.
(5) fluorescensmikroskop lyskilde levetid er begrænset, prøven bør være centraliseret inspektion, for at spare tid og beskytte lyskilden. Når det er varmt, skal der tilføjes blæserkøling, ny pære skal registreres fra begyndelsen af brugen af tiden. Når lampen er slukket og ønsker at blive brugt igen, skal pæren være tilstrækkeligt afkølet inden tænding. Lyskilden bør undgås flere gange.
(6) Observer prøven umiddelbart efter farvning, da fluorescensen gradvist vil aftage over tid. Hvis prøven anbringes i en polyethylen-plastikpose opbevaret ved 4 grader, kan det forsinke tidspunktet for svækkelse af fluorescens og forhindre fordampning af tætningsmidlet.
(7) Bedømmelseskriterier for fluorescenslysstyrke: generelt opdelt i fire niveauer, dvs. 'et' - ingen eller synlig svag fluorescens. '+' - kun tydelig synlig fluorescens. '+ +' - synlig med en lys
