Funktioner af hvert filter i et fluorescensmikroskop
Det mest kritiske problem med fluorescensmikroskopi er kombinationen af optiske filtre. Både excitationsfilteret og afskærmningsfilteret skal være egnet til det observerede fluorescerende materiale og matchet med hinanden. For nogle specifikke applikationer, hvis der er fejl i valg af filtre, kan det føre til misforståelser og endda forkerte resultater. Resultaterne af fluorescensmikroskopiteknologi er uadskillelige fra høj-kvalitetsfiltre og smart matchede filtergrupper. Der findes flere typer filtre til fluorescensmikroskopi.
1. Varmeabsorberende filter
Varmeabsorberende filter er et nødvendigt filter for at forhindre termisk stråling i lyskildespektret i at beskadige det optiske system. Tidlige avancerede mikroskoper var udstyret med tromleformede flasker, der kunne indeholde destilleret vand som varmeabsorberende anordninger. Moderne forskningsmikroskoper i stor skala er udstyret med varmeabsorberende glasfiltre i lyskilder eller lampekamre, som er gennemsigtige og let gule glasplader. Leitz's KG1 (2 mm) og BG38 (4 mm) filtre kan transmittere næsten alle ultraviolette og synlige lysspektre med en lystransmissionshastighed på op til 98%. Den absorberer kun selektivt infrarød fototermisk stråling.
2. Excitationsfilter
Excitationsfiltre kan selektivt absorbere lange bølgelængdespektrallinjer og kun transmittere ultraviolet lys. Filtre for lilla, blåt og grønt lys er excitationsfiltre. Zeiss, Reichert, Olympus' B-serie, G-serie, BG-serie, Shotts UG-serie, Optons H, G, BP-serie, Leitz' BP-serie og andre optiske filtre er alle excitationsfiltre.
3. Blokerende filter
Et blokeringsfilter er et filter, der selektivt absorberer kortbølgespektrallinjer og infrarøde stråler, samtidig med at længere bølger kan ses. Dens funktion er at gøre det muligt for observatøren at se fluorescensen exciteret af det objekt, der inspiceres, samtidig med at observatørens hornhinde beskyttes mod UV-skader.
4. Farveadskillelsesfilter
Farveadskillelsesfilter er et filterspejl, der reflekterer excitationslys på det objekt, der inspiceres, hvilket får objektet til at udsende fluorescens og derefter transmitterer fluorescensen til okularet. Denne type filter kan kun bruges i en faldende lys kondensator, mens et transmitteret lys fluorescensmikroskop ikke kræver farveseparation.
5. Interferensfilter
Interferensfilter er en type-højtydende excitationsfilter. Det er et filter lavet ved at stable flere tynde metalfilm mellem to polerede glasplader. Brydningsindekset for hver tynd metalfilm er forskellig, så spektrallinjerne af forskellige bølgelængder af belysningslyskilden reflekteres gentagne gange på hver metalfilm. Nogle spektrallinjer med visse bølgelængder udlignes af destruktiv interferens, mens andre forstærkes af additiv interferens og transmitteres igennem. Dette resulterer i et filter med et smalt transmissionsspektrum og en halv spidsbredde på kun 6-20nm. Transmittansen kan nå 60% -70%.
