Hvordan fluorescensmikroskopi adskiller sig fra konfokal lasermikroskopi
Fluorescensmikroskop
1. Et fluorescensmikroskop bruger ultraviolet lys som lyskilde til at belyse objektet, der inspiceres, for at få det til at udsende fluorescens, og derefter observere formen og placeringen af objektet under mikroskopet. Fluorescensmikroskopi bruges til at studere absorption og transport af stoffer i celler, samt fordeling og placering af kemiske stoffer. Nogle stoffer i celler, såsom klorofyl, kan fluorescere efter at være blevet bestrålet af ultraviolette stråler; nogle stoffer kan ikke selv fluorescere, men hvis de er farvet med fluorescerende farvestoffer eller fluorescerende antistoffer, kan de fluorescere efter bestråling med ultraviolette stråler. Fluorescensmikroskopi er et af værktøjerne til kvalitativ og kvantitativ forskning i sådanne stoffer.
2. Princippet for fluorescensmikroskop:
(A) Lyskilde: Lyskilden udstråler lys af forskellige bølgelængder (fra ultraviolet til infrarødt).
(B) Excitationsfilterlyskilde: transmitterer lys med en specifik bølgelængde, der kan få prøven til at fluorescere, mens den blokerer lys, der er ubrugeligt til at stimulere fluorescens.
(C) Fluorescerende prøver: Generelt farvet med fluorescerende pigmenter.
(D) Blokerende filter: Blokerer excitationslyset, der ikke absorberes af prøven, og transmitterer selektivt fluorescens. Nogle bølgelængder i fluorescensen transmitteres også selektivt. Et mikroskop, der bruger ultraviolet lys som lyskilde til at få den oplyste genstand til at fluorescere. Elektronmikroskopet blev først samlet i 1931 i Berlin, Tyskland af Knorr og Hallowska. Dette mikroskop bruger en højhastigheds elektronstråle i stedet for en lysstråle. Da elektronstrømmens bølgelængde er meget kortere end lysets, kan forstørrelsen af elektronmikroskopet nå 800,000 gange, og den minimale opløsningsgrænse er 0,2 nanometer. Scanningselektronmikroskopet, som begyndte at blive brugt i 1963, giver folk mulighed for at se de små strukturer på overfladen af objekter.
3. Anvendelsesområde: Bruges til at forstørre billeder af små objekter. Generelt brugt til observation af biologi, medicin, mikroskopiske partikler osv.
konfokalt mikroskop
1. Det konfokale mikroskop tilføjer en semireflekterende semi-linse til den optiske vej af det reflekterede lys, som bryder det reflekterede lys, der er passeret gennem linsen, til andre retninger. Der er en baffel med et nålehul i fokus, og nålehullet er placeret Ved brændpunktet, bag panelet, er et fotomultiplikatorrør. Man kan forestille sig, at det reflekterede lys før og efter detektionslysfokuset passerer gennem dette konfokale system og ikke kan fokuseres på det lille hul, og vil blive blokeret af baffelen. Så det fotometret måler er intensiteten af reflekteret lys ved fokus.
2. Princip: Traditionelle optiske mikroskoper bruger feltlyskilder, og billedet af hvert punkt på prøven vil blive forstyrret af diffraktion eller spredt lys fra tilstødende punkter; laserscanning konfokale mikroskoper bruger laserstråler til at danne punktlyskilder gennem oplysende nålehuller for at oplyse det indre af prøven. Hvert punkt i brændplanet scannes, og det belyste punkt på prøven afbildes ved detektionsnålhullet, som modtages punkt for punkt eller linje for linje af fotomultiplikatorrøret (PMT) eller koldkoblingsenheden (cCCD) bag detekteringen pinhole, og er hurtigt Et fluorescerende billede dannes på computerskærmen. Belysningsnålehullet og detektionsnålehullet er konjugerede i forhold til objektivlinsens brændplan. Punkter på brændplanet er fokuseret på belysningsnålehullet og emissionsnålehullet på samme tid. Punkter uden for brændplanet vil ikke blive afbildet ved detektionsnålehullet. Dette opnås Konfokale billeder er optiske tværsnit af prøver, der overvinder manglerne ved slørede billeder i almindelige mikroskoper.
3. Anvendelsesområder: Involverer medicin, dyre- og plantevidenskabelig forskning, biokemi, bakteriologi, cellebiologi, vævsembryologi, fødevarevidenskab, genetik, farmakologi, fysiologi, optik, patologi, botanik, neurovidenskab, havbiologi og materialevidenskab, elektronisk videnskab , mekanik, petroleumsgeologi, mineralogi.
