Forbedrede fordele ved laserscanning multifotonmikroskopi
Laserscanning multifotonmikroskopi er en væsentlig forbedring af optisk mikroskopi, hovedsageligt til at observere den dybe struktur af levende celler, fikserede celler og væv, og kan opnå klare og skarpe flerlags Z-plan strukturer, det vil sige optiske skiver, og kan konstruere Den tredimensionelle faste struktur af prøven. Det konfokale mikroskop bruger en laserlyskilde, som udvides til at fylde hele objektivlinsens bagerste brændplan, og derefter konvergerer til et meget lille punkt på præparatets brændplan gennem objektivlinsens linsesystem. Afhængigt af den numeriske blænde på objektivlinsen er diameteren af det klareste belysningspunkt ca. 0.25 ~ 0.8 μm, og dybden er ca. 0.5 ~ 1.5 μm. Størrelsen af den konfokale plet afhænger af mikroskopets design, laserbølgelængden, objektivlinsens karakteristika, scanningsenhedens tilstandsindstilling og prøvens art. Feltmikroskoper har et stort belysningsområde og en stor belysningsdybde, mens konfokale mikroskoper har belysning, der er koncentreret i et brændpunkt på brændplanet. Den mest grundlæggende fordel ved konfokal mikroskopi er, at den kan udføre fin optisk sektionering af tykke fluorescerende prøver (op til 5 0 μm eller mere) med en tykkelse på omkring 0,5 til 1,5 μm. En række optiske snitbilleder kan opnås ved at flytte prøven op og ned med mikroskopets Z-akse stepmotor. Indsamlingen af billedinformation styres inden for planet og vil ikke blive forstyrret af signaler fra andre steder på prøven. Efter at have fjernet effekten af baggrundsfluorescens og øget signal-til-støj-forhold, er kontrasten og opløsningen af konfokale billeder væsentligt forbedret sammenlignet med traditionelle feltbelysningsfluorescensbilleder. I mange eksemplarer er mange indviklede strukturelle komponenter flettet sammen for at danne komplekse systemer, men når nok optiske sektioner kan indsamles, kan vi rekonstruere dem i 3D gennem software. Denne eksperimentelle tilgang er blevet brugt i vid udstrækning i biologisk forskning for at belyse de komplekse strukturelle og funktionelle forhold mellem celler eller væv.
