Fordelene ved laserscanning med multifotonmikroskopi forbedres
Laser Scanning Multi-Photon Microscope er en væsentlig forbedring inden for optisk mikroskopi, hovedsageligt i evnen til at observere den dybe struktur af levende og fikserede celler og væv og til at opnå klare og skarpe flerlagede Z-plan strukturer, dvs. optiske skiver, hvorfra en tredimensionel fast struktur af prøven kan konstrueres. Konfokalmikroskopi bruger en laserlyskilde, der udvides til at fylde hele det bagerste brændplan af objektivlinsen, og derefter passerer gennem objektivlinsens linsesystem for at konvergere til meget små pletter på prøvens fokalplan. Afhængigt af den numeriske blænde på objektivlinsen er størrelsen af det lyse belysningspunkts diameter ca. 0.25 ~ 0.8 μm og dybden er ca. 0.5 ~ 1.5 μm. Størrelsen af det konfokale punkt bestemmes af mikroskopets design, laserbølgelængden, objektivlinsens karakteristika, scanningsenhedens tilstandsindstilling og prøvens art. Feltmikroskoper har et stort belysningsområde og belysningsdybde, hvorimod konfokale mikroskoper koncentrerer belysningen til et enkelt brændpunkt på brændplanet. Den mest grundlæggende fordel ved et konfokalt mikroskop er evnen til at lave fine optiske snit af tykke fluorescerende prøver (op til 5 0 μm eller mere) med snittykkelser på omkring 0,5 til 1,5 μm. En række optiske snitbilleder kan opnås ved at flytte prøven op og ned med mikroskopets Z-akse stepmotor. Indsamlingen af billedinformation styres i det første plan og forstyrres ikke af signaler, der udsendes fra andre steder på prøven. Efter at have fjernet virkningerne af baggrundsfluorescens og øget signal-til-støj-forhold, er kontrasten og opløsningen af det konfokale billede væsentligt forbedret i forhold til konventionelle feltbelyste fluorescensbilleder. I mange prøver flettes mange indviklede strukturelle komponenter sammen for at danne komplekse systemer, men når nok optiske sektioner kan erhverves, kan vi rekonstruere dem i tre dimensioner ved hjælp af software. Denne eksperimentelle metode er blevet brugt i vid udstrækning i biologisk forskning for at belyse de komplekse strukturelle og funktionelle forhold mellem celler eller væv.
