Krav til optisk mikroskop tykkelse for glasobjektglas
Mikroskopisk dehydrering og prøvevedhæftning: På grund af gentagen centrifugering går cellerne tabt, så det er bedst at fastgøre cellerne til overfladen af et objektglas eller plastikplade til optisk mikroskopi, så cellerne dehydreres og tørres sammen med glasset dias eller plastfolie. Krav til tykkelsen af objektglas i optisk mikroskopi For at tillade celler at sætte sig fast på objektglas eller plastikplader, er det nødvendigt først at lægge et lag film på objektglas eller plastikplader. Metoden til at lægge filmen er som følger:
(1) Den enkleste metode til optisk mikroskopi er at lægge et tyndt lag polyvinylformal (formvar) film. Læg de rensede objektglas i blød i (0.5-1) procent polyvinylformel chloroformopløsning. Efter at atmosfæren er fordampet, vises en hvid film på objektglassene. Ryst objektglassene flere gange i kloroformen for at få filmen til at ændre sig. Tynd og klar til brug.
(2) Drop 0.1 latitude poly-L-lysin (opløs 1 mg poly-lysin i 1 ml filtreret vand under tilberedning) på det rensede glasobjektglas, og læg det i en 450C forsyningsboks, efter at dråben er foldet ud . tør. Denne metode er bedst, fordi poly-L-lysin er positivt ladet, hvilket tillader flere negativt ladede overfladeceller at vedhæfte.
(3) Tilsæt plasma og glycerol til destilleret vand i forholdet (30--40) procent og (3-5) procent i overensstemmelse med kravene i det optiske mikroskop til tykkelsen af objektglasset for at danne et glycerolprotein løsning. Væsken dryppes på det rensede objektglas, foldes ud og tørres under det optiske mikroskop. Den udlagte proteinfilm nedsænkes i 2 procent glutaraldehyd for at fiksere proteinet, vaskes og tørres til senere brug. Før brug tabes plasmaet på proteinfilmen Gør den "aktiveret", skyl med buffer efter 30 minutter, og den kan påføres direkte.
De fikserede og rensede celler laves til en passende koncentration af cellesuspension med filtreret vand under et digitalt mikroskop, og det optiske mikroskop placeres på et objektglas eller en plastikplade, der er dækket med en membran, og anbringes i et fugtigt, lavt temperatur (40C) miljø (30-120) minutter for at tillade cellerne at binde sig til membranen. Brug en fin pincet til at tage objektglasset op og ryst det i rent dobbeltdestilleret vand, og vask ubundne celler væk med et optisk mikroskop. Krav til tykkelsen af objektglas i optiske mikroskoper Polariserende mikroskoper placeres derefter hurtigt i en beholder fyldt med 50 procent acetone (eller ethanol). Dehydreringsprocessen er at sætte objektglassene i acetone eller ethanol med stigende koncentration hvert 3. minut, og det optiske mikroskop eller kontinuerligt øge koncentrationen af dehydreringsmidlet i objektglasbeholderen. Ifølge forfatterens laboratorieerfaring er sidstnævnte operation mere bekvem. Den specifikke metode til optisk mikroskopi kan suge halvdelen af dehydreringsmidlet ud i beholderen hvert 3. minut og derefter tilsætte en tilsvarende mængde dehydreringsmiddel med en koncentration på 100 procent. Efter 5-6 operationer når koncentrationen af dehydreringsmidlet i mikroskopprisbeholderen over 0,5 procent, og cellerne dehydreres med succes. Efter tørring på et kritisk punkt limes glaspladen eller plastikpladen til prøvemolen med ledende klæbemiddel til metalbelægning. Der er også bekvemmeligheder til vedhæftning af celler til membraner fastsat ved den tredje metode. Optisk mikroskop kan hænge cellerne fikseret ved lav koncentration af glutaraldehyd på den "aktiverede" proteinfilm. Det optiske mikroskop kræver, at tykkelsen af objektglasset placeres i 10 minutter, og objektglasset eller plastikpladen er gennemblødt i 2 procent glutaraldehyd. Efter 30 minutter skylles med filtreret dobbeltdestilleret vand og derefter dehydreres, tørres og metalbelægges i henhold til ovenstående metode.
