PH meter - Bestemmelse og justering af medium pH
Alle mikroorganismer påvirkes af pH-værdien i det miljø, de lever i. Ofte indsnævrer tilstedeværelsen af selektive arter pH-området, hvori de vokser. Nogle gange kan surheden eller alkaliniteten af mediet også fungere som en vækstudvælgelsesfaktor. For biokemiske testmedier er pH-området, hvori mikroorganismer udviser tk-aktivitet i substratet, imidlertid snævrere end det pH-område, der kræves for vækst: derfor er det vigtigt at justere mediets pH til det forventede område. Når laboratoriet forbereder mediet efter mediesammensætningen, skal pH kontrolleres og justeres. Det skal påpeges, at selv for det færdiglavede syntetiske dehydrerede medium leveret af producenten (især for nogle dehydrerede lagermedier), skal den endelige pH-værdi måles efter fremstilling af forsøgsmediet.
Den mest nøjagtige måde at måle pH i et medium på er med et pH-meter. Før brug skal den kalibreres med en standard bufferopløsning med kendt pH (normalt er pH 4 til 7). Skyl pH-meterets elektrode med destilleret vand og nedsænk den i dyrkningsmediet i bægerglasset, og aflæs derefter dyrkningsmediets pH fra pH-meterets skala. Hver producent giver detaljerede betjeningsvejledninger for hver type pH-meter.
Ved tilberedning af dyrkningsmediet kan PH let justeres ved hjælp af et pH-meter med mekanisk omrøring. Dyrkningsmediet skal tilberedes i en beholder (såsom et stort bægerglas), der kan omrøres kontinuerligt. eller Teflon-omviklede magneter. pH-værdien af det agarholdige medium skal justeres efter optøning, hvilket nemt gøres med en opvarmelig magnetomrører. Når du justerer pH, skal du bruge en standard bufferopløsning med kendt pH til at kalibrere pH-meteret først. Sæt derefter kompositelektroden og modstandstermometeret (hvis nogen) i mediet, tilsæt langsomt passende mængde saltsyre og natriumhydroxid fra enden af bægeret væk fra elektroden, så mediet kan nå og opretholde den nødvendige pH.
Temperaturkompensationen af pH-meteret bør tage højde for temperaturens indvirkning på elektrodesystemet: I nogle fortyndinger og medier ændrer pH sig betydeligt med temperaturen. For flydende medier og fortyndinger kan pH-værdien normalt justeres og måles enten ved 25 grader eller ved den temperatur, de bruges ved.
pH-værdien af agarmediet skal justeres efter opløsning, og opløsningstemperaturen er over 45 grader: derfor bør pH-værdien af det faste medium bestemmes ved dets brugstemperatur. På dette tidspunkt skal der bruges en fladt kompositelektrode, og pH-meterets temperaturkompensation skal kalibreres manuelt. Ved fremstilling af dyrkningsmediet, hvis det konstateres, at dyrkningsmediets pH er forskellig mellem smeltetilstand og størkningstilstand, betyder det, at der er en fejl ved justering af pH.
Ligeledes, når det fremstillede medium varmesteriliseres (f.eks. autoklaveres), kan det også undergå pH-ændringer. For det dehydrerede medium har producenten taget dette i betragtning, og normalt er det ikke nødvendigt at justere pH-værdien, men pH-værdien af mediet, der skal bruges, bør kontrolleres omhyggeligt. Hvis pH-værdien af det dehydrerede agarmedium skal justeres under genopløsning eller klargøring, er det bedst at justere det med filtersteriliseret saltsyre og natriumhydroxidopløsning efter steriliseringstrinnet for at undgå dannelse af overophedning af mediet. Ved fremstilling af medier med forskellige råmaterialer eller lægemidler skal mediets pH kontrolleres efter autoklavering. Desuden, hvis pH-værdien af mediet viser sig at ændre sig efter hver autoklave, kan pH-værdien justeres passende, når mediet tilberedes. Det er dog stadig nødvendigt at bestemme mediets endelige pH efter sterilisering.
