Forberedelse og observation af biologiske prøver til elektronmikroskopi
Mikroskopets opløsning afhænger af bølgelængden af det anvendte lys, elektronmikroskopet begyndte at dukke op i 1933 skyldes brugen af en meget kortere bølgelængde end elektronstrålens synlige lys som lyskilde, således at opløsningen den kan opnå end det optiske mikroskop meget forbedret. Den forskellige lyskilde bestemmer også en række forskelle mellem elektronmikroskopet og det optiske mikroskop.
Ifølge forskellene i elektronstrålens billeddannelsesprincip og prøvens rolle på de forskellige måder, er det moderne elektronmikroskop blevet udviklet til at danne en række typer, på nuværende tidspunkt * almindeligt anvendt er transmissionselektronmikroskopet og scanningselektronen mikroskop, førstnævnte kan være i området 1,000-1,000,000 gange den samlede forstørrelse af intervallet af ændringer, sidstnævnte kan være i den samlede forstørrelse af { {4}},000 gange den samlede forstørrelse af ændringerne mellem. Dette eksperiment fokuserer på forberedelse af prøver til de to typer mikroskoper, transmissionselektronmikroskop og scanningselektronmikroskop.
Materialer
1. Stamme Escherichia coli (Escherichia coli, Escherichia coli) skrå.
2. Opløsninger eller reagenser Amylacetat, koncentreret svovlsyre, vandfri ethanol, sterilt vand, 2 % natriumphosphowolframsyre (pH 6.5-8.0) vandig opløsning, 0,3 % polyvinylformaldehyd (opløst i trichlormethan) opløsning, cytochrom c, ammoniumacetat, plasmid pBR322.
3. Instrumenter eller andet tilbehør Almindelig optisk mikroskop, kobbernet, porcelænstragt, bægerglas, fladt fad, steril burette, steril pincet, lancet, objektglas, ** tælleplade, vakuumcoater, kritisk punkttørrer og så videre.
Driftstrin
(I) Prøveforberedelse og observation af transmissionselektronmikroskopi
1. Behandling af metalnet
Prøver til optisk mikroskopi placeres på objektglas til observation. Men i transmissionselektronmikroskopi, da elektroner ikke kan trænge ind i glaspladen, kan kun maskemateriale bruges som bærer, normalt kaldet bærenet. Bærenettet kan opdeles i mange forskellige specifikationer på grund af forskellige materialer og former, hvoraf det almindeligt anvendte * er 200-400-nettet (antal huller) kobbernet. Kobbernet bør behandles før brug for at fjerne snavs på det og holde det rent, ellers vil det påvirke kvaliteten af støttefilmen og klarheden af prøvebillederne. Kobbernettet, der er brugt i dette forsøg, er 400 mesh, som kan behandles på følgende måde: først bleges det med amylacetat i et par timer, skylles derefter med destilleret vand i flere gange, og derefter bleges det i vandfri ethanol for dehydrering. Hvis kobbernettet ved ovenstående metode stadig ikke er rent, kan det bruges til at fortynde koncentreret svovlsyre (1:1) nedsænket i 1 ~ 2 minutter, eller i 1% NaOH-opløsning kogt i flere minutter, skyllet flere gange med destilleret vand , anbragt i vandfri ethanol-dehydrering, der skal anvendes.
2. Udarbejdelse af støttefilm
I prøveobservationen skal bærenetværket også dækkes med et lag ustruktureret, ensartet film, ellers vil små prøver lække ud af hullerne i bærenetværket, dette lag af film kaldes normalt støttefilmen eller bærefilmen. Understøtningsfilmen skal være transparent for elektroner, og dens tykkelse bør generelt være mindre end 20 nm; under påvirkning af elektronstrålen skal filmen også have en vis grad af mekanisk styrke, kan opretholde strukturens stabilitet og have god termisk ledningsevne; derudover bør støttenetværket ikke have nogen synlig struktur under elektronmikroskopet, og det har ikke en kemisk reaktion med prøven båret og forstyrrer ikke observationen af prøven, og dens tykkelse er generelt omkring 15 nm. Støttefilmen kan være lavet af plastfilm (f.eks. brandbomuldsfilm, polyethylenformaldehydfilm osv.), kulfilm eller metalfilm (f.eks. berylliumfilm osv.). Under rutinemæssige arbejdsforhold kan kravene opfyldes med en plastfilm, mens fremstillingen af plastfilmen i brandbomuldslimfilmen er forholdsvis let, men styrken er ikke så stærk som polyethylenformaldehydfilm.
