Struktur og hovedkomponenter i et fluorescensmikroskop
Fluorescensmikroskopi er et vigtigt værktøj i immunfluorescerende cytokemi. Det er sammensat af hovedkomponenter såsom lyskilde, filterpladesystem og optisk system. Det er at bruge en vis bølgelængde af lys til at excitere prøven til at udsende fluorescens, og at observere fluorescensbilledet af prøven ved at forstærke objektivlinsen og okularsystemet.
Struktur og hovedkomponenter i et fluorescensmikroskop
(1) Lyskilde
I dag bruges 200W ultrahøjtryks-kviksølvlamper ofte som lyskilder. De er lavet af kvartsglas, med en sfærisk form i midten, og en vis mængde kviksølv er fyldt indeni. Under arbejdet får udladningen mellem de to elektroder kviksølv til at fordampe, og lufttrykket i kuglen stiger hurtigt. Når kviksølvet er fuldstændigt fordampet, kan det nå 50-70 standard atmosfærisk tryk, og denne proces tager generelt omkring 5-15 minutter. Luminescensen af kviksølvlampen med ultrahøjt tryk er resultatet af emissionen af lyskvanter under den kontinuerlige dissociation og reduktion af kviksølvmolekyler ved udladningen mellem elektroderne. Det udsender stærkt ultraviolet og blåviolet lys, hvilket er nok til at excitere forskellige fluorescerende stoffer, så det er meget brugt i fluorescensmikroskopi.
Ultrahøjtryks kviksølvlamper udsender også meget varme. Derfor skal lampehuset have gode varmeafledningsforhold, og arbejdsmiljøtemperaturen bør ikke være for høj.
Den nye ultrahøjtryks kviksølvlampe kan tændes uden højspænding i begyndelsen af brugen. Efter en tids brug skal den startes ved højspænding (ca. 15000V). Efter start er vedligeholdelsesarbejdsspændingen generelt 50-60V, og arbejdsstrømmen er omkring 4A. Den gennemsnitlige levetid for en 200W ultrahøjtrykskviksølvlampe er omkring 200 timer, hvis den bruges i 2 timer hver gang. Jo kortere arbejdstid, jo kortere levetid. Hvis den kun bruges i 20 minutter, reduceres levetiden med 50 procent. Minimer derfor antallet af starter, når du bruger det. Under brugen af pæren reduceres dens lyseffekt gradvist. Når lyset er slukket, skal du vente på, at det er kølet af, før du genstarter. Sluk ikke pæren umiddelbart efter at have tændt den, for ikke at beskadige elektroden på grund af ufuldstændig kviksølvfordampning. Generelt skal den vente i 15 minutter. På grund af ultrahøjtrykskviksølvlampens høje tryk og de stærke ultraviolette stråler skal pæren placeres i lampekammeret, før den kan antændes, for ikke at beskadige øjnene og forårsage drift i tilfælde af en eksplosion .
Kredsløbet af ultrahøjtryks kviksølvlampen (100W eller 200W) lyskilde og flere dele inklusive transformer, ballast og start. Der er et system til justering af pærens lysende centrum i lampekammeret. En aluminium-belagt konkav reflektor er monteret bag pæren, og en lyssamlende linse er installeret foran.
Den indenlandske ultrahøjtrykskviksølvlampe GCQ-200 har god ydeevne og kan erstatte importerede pærer såsom HBO-200. Den gennemsnitlige levetid er mere end 200 timer, og prisen er relativt lav.
En enkel og bærbar højfarvetemperatur brom wolfram fluorescerende lyskilde, der er udviklet i mit land, har lille størrelse, lav vægt, lav strøm, AC og DC dual-use (med DC strømforsyning), nem at bære, nem at bruge og har blevet populariseret og anvendt.
(2) Farvefiltersystem
Farvefiltersystemet er en vigtig del af fluorescensmikroskopet, som består af en excitationsfilterplade og en pressende filterplade. Filterplademodellen og navnet på hver producent er ofte ikke ensartede. Filterpladerne er generelt opkaldt efter grundfarven, bogstaverne foran repræsenterer farven, bogstaverne bagpå repræsenterer glasset, og tallene repræsenterer modellens egenskaber. olympus mikroskop
(3) Objektiv linse
Forskellige objektivlinser kan bruges, men akromatiske objektivlinser bruges, fordi deres autofluorescens er minimal, og deres lystransmissionsegenskaber (bølgelængdeområde) er velegnede til fluorescens. Da fluorescenslysstyrken af billedet i mikroskopets synsfelt er proportional med kvadratet af blændeforholdet for objektivlinsen og omvendt proportional med dets forstørrelse, for at forbedre lysstyrken af fluorescensbilledet, en objektivlinse med en stor blændeforhold skal bruges. Især ved høj forstørrelse er dens effekt meget tydelig. For prøver med utilstrækkelig fluorescens bør der derfor anvendes en objektivlinse med et stort blændeforhold med et så lavt okular som muligt (4×, 5×, 6,3× osv.).
(4) Spejl
Reflektorens reflekterende lag er generelt aluminiumbelagt, fordi aluminium absorberer mindre i det blå-violette område af ultraviolet lys og synligt lys, og refleksionen er mere end 90 procent, mens refleksionen af sølv kun er 70 procent. Generelt bruges en flad reflektor.
(5) Kondensator
Kondensatorer designet til fluorescensmikroskopi er lavet af kvartsglas eller andet UV-transparent glas. Der er to typer klarfeltskondensatorer og mørkefeltskondensatorer. Der er også fasekontrast fluorescenskoncentratorer.
(6) Epi-light enhed
Den nye type epi-lysanordning er, at efter at lyset fra lyskilden rammer det interferensspektroskopiske filter, reflekteres den korte bølgelængdedel (ultraviolet og lilla blå) på grund af egenskaberne af belægningen på filteret. Når filteret vender mod lyskilden, er vinklen 45. Når det vippes, skyder det lodret til objektivlinsen og skyder til prøven gennem objektivlinsen, så prøven exciteres. På dette tidspunkt fungerer objektivlinsen direkte som en lysopsamler. Samtidig er den lange del af filteret (grøn, gul, rød osv.) transparent for filteret, så det reflekteres ikke i retning af objektivlinsen, og filteret fungerer som en excitationsfilterplade, fordi fluorescensen af prøven er i langbølgelængdeområdet for synligt lys, kan passere gennem filteret og nå okularet til observation, øges lysstyrken af det fluorescerende billede med forøgelsen af forstørrelsen og er stærkere end det transmitterede lys kilde ved høj forstørrelse. Ud over funktionen af en transmissionslyskilde er den mere velegnet til direkte observation af uigennemsigtige og gennemskinnelige prøver, såsom tykke skiver, filtermembraner, kolonier og vævskulturprøver. De nye fluorescensmikroskoper, der er udviklet i de senere år, bruger for det meste epi-lys-enheder, som kaldes epi-fluorescensmikroskoper.
