Princippet og strukturelle karakteristika ved fluorescensmikroskopi
Fluorescensmikroskopi bruger et punkt med høj lyseffektivitet til at udsende en vis bølgelængde af lys (såsom ultraviolet lys 3650 tommer eller violet blåt lys 4200 tommer) gennem et farvefiltreringssystem som excitationslys og exciterer de fluorescerende stoffer i prøven til at udsende forskellige fluorescensfarver. Derefter observeres det gennem forstørrelse af objektivlinsen og okularet. På denne måde er det let at genkende, selv når fluorescensen er meget svag mod en stærk baggrund, med høj følsomhed. Det bruges hovedsageligt til undersøgelse af cellestruktur og funktion samt kemisk sammensætning. Den grundlæggende struktur af et fluorescensmikroskop er sammensat af et almindeligt optisk mikroskop plus tilbehør såsom en fluorescerende lyskilde, excitationsfilter, dikroisk stråleseparator og blokeringsfilter. Fluorescerende lyskilder bruger generelt ultrahøjtrykskviksølvlamper (50-200W), som kan udsende lys med forskellige bølgelængder. Hvert fluorescerende stof har dog en excitationslysbølgelængde, der producerer den stærkeste fluorescens, så excitationsfiltre (typisk ultraviolette, lilla, blå og grønne excitationsfiltre) skal tilføjes for kun at tillade en vis bølgelængde af excitationslys at trænge ind og bestråle prøven, mens den absorberer alt andet lys. Efter at være blevet bestrålet med excitationslys udsender hvert stof synlig fluorescens længere end bestrålingsbølgelængden på meget kort tid. Fluorescens har specificitet og er generelt svagere end excitationslys. For at observere specifik fluorescens er det nødvendigt at tilføje blokering (eller undertrykkelse) bag objektivlinsen og bruge den i kombination.
Forskellen mellem fluorescensmikroskop og almindeligt mikroskop
1. Belysningsmetoden er sædvanligvis en faldende stråletype, hvor lyskilden projiceres på prøven gennem en objektivlinse;
2.Lyskilden er ultraviolet lys, med en kortere bølgelængde og højere opløsning end almindelige mikroskoper;
3.Der er to specielle filtre, det ene foran lyskilden bruges til at filtrere synligt lys fra, og det mellem okularet og objektivlinsen bruges til at filtrere ultraviolette stråler fra for at beskytte det menneskelige øje.
Fluorescensmikroskopi er også en type optisk mikroskopi, hvor hovedforskellen er de forskellige excitationsbølgelængder. Dette bestemmer forskellene i struktur og anvendelse mellem fluorescensmikroskopi og almindelig optisk mikroskopi.
Fluorescensmikroskopi er et grundlæggende værktøj til immunfluorescenscytokemi. Det er sammensat af hovedkomponenter såsom en lyskilde, et filterpladesystem og et optisk system. Den bruger en vis bølgelængde af lys til at excitere prøven til at udsende fluorescens, og forstørrer den gennem en objektivlinse og okularsystem for at observere fluorescensbilledet af prøven.
