Formålet, egenskaberne og brugen af et fluorescensmikroskop
Princippet og strukturelle egenskaber ved fluorescensmikroskopet: fluorescensmikroskopet bruger en punktlyskilde med høj lyseffektivitet til at udsende en vis bølgelængde af lys (såsom ultraviolet lys 3650 tommer eller lilla blåt lys 4200 tommer) gennem filtersystemet som excitation lys for at stimulere fluorescensen i prøven. Efter at stoffet udsender fluorescens af forskellige farver, observeres det gennem forstørrelsen af objektivlinsen og okularet. På denne måde, under en stærk kontrast baggrund, selv om fluorescensen er meget svag, er den let at identificere og har høj følsomhed. Det bruges hovedsageligt til forskning i cellestruktur og funktion og kemisk sammensætning. Den grundlæggende struktur af et fluorescensmikroskop er sammensat af et almindeligt optisk mikroskop plus noget tilbehør (såsom en fluorescerende lyskilde, et excitationsfilter, en tofarvet stråledeler og et blokeringsfilter osv.). Fluorescerende lyskilde – brug generelt ultrahøjtryks-kviksølvlampe (50-200W), som kan udsende lys med forskellige bølgelængder, men hvert fluorescerende stof har en excitationsbølgelængde, der producerer den stærkeste fluorescens, så et excitationsfilter (Generelt, der er ultraviolette, lilla, blå og grønne excitationsfiltre), som kun tillader excitationslys af en vis bølgelængde at passere igennem og bestråle prøven, mens de absorberer andet lys. Efter at hvert stof er bestrålet med excitationslys, udsender det synlig fluorescens med en længere bølgelængde end bestrålingsbølgelængden på meget kort tid. Fluorescens er specifik og generelt svagere end excitationslys. For at observere specifik fluorescens kræves et blokerende (eller undertrykkende) filter bag objektivlinsen.
Den har to funktioner: den ene er at absorbere og blokere excitationslyset i at trænge ind i okularet, for ikke at forstyrre fluorescensen og beskadige øjnene; den anden er at vælge og lade den specifikke fluorescens passere igennem og vise en specifik fluorescerende farve. De to filtre skal bruges sammen.
Der er to typer fluorescensmikroskoper med hensyn til deres optiske veje:
1. Transmissionsfluorescensmikroskop: Excitationslyskilden føres gennem prøvematerialet gennem en kondensatorlinse for at excitere fluorescens. En mørk feltsamler er almindeligvis brugt, og en almindelig solfanger kan også bruges til at justere spejlet, så excitationslyset omdirigeres og omgås til prøven. Dette er et ældre fluorescerende mikroskop. Fordelen er, at fluorescensen er stærk ved lav forstørrelse, men ulempen er, at fluorescensen falder med forøgelsen af forstørrelsen. Derfor er det bedre at observere større prøvematerialer.
2. Epi-fluorescensmikroskop er en ny type fluorescensmikroskop udviklet i moderne tid. Forskellen er, at excitationslyset falder fra objektivlinsen ned til overfladen af prøven, det vil sige, at den samme objektivlinse bruges som belysningskondensatoren og objektivlinsen til opsamling af fluorescens. Der skal tilføjes en dikroisk stråledeler i lysvejen, som er 45 grader væk fra det lette uran. Excitationslyset reflekteres ind i objektivlinsen og opsamles på prøven. Fluorescensen genereret af prøven og excitationslyset, der reflekteres af objektivets linseoverflade og dækglasoverfladen, går ind i objektivlinsen på samme tid og vender tilbage til tofarvestråledeleren for at gøre excitationslyset adskilt fra fluorescens , absorberes resterende excitationslys af blokerende filtre. Såsom at skifte til en kombination af forskelligt excitationsfilter/tofarvet stråledeler/blokeringsfilter, kan det opfylde behovene for forskellige fluorescerende reaktionsprodukter. Fordelen ved denne form for fluorescensmikroskop er, at belysningen af synsfeltet er ensartet, billeddannelsen er klar, og jo større forstørrelse, jo stærkere fluorescens.
(2) Sådan bruges fluorescensmikroskopet.
1. Tænd for lyskilden, og ultrahøjtryks-kviksølvlampen skal varmes op i et par minutter for at nå det lyseste punkt.
2. Transmissionsfluorescensmikroskopet skal installere det nødvendige excitationsfilter mellem lyskilden og kondensatoren og installere det tilsvarende blokeringsfilter bag objektivlinsen. Epi-fluorescensmikroskoper skal indsætte det påkrævede excitationsfilter/dobbeltfarvede stråledeler/blokerende filterindsatser i spalterne i den optiske vej.
3. Observer med en linse med lav forstørrelse, og juster midten af lyskilden, så den er placeret i midten af hele belysningspunktet i henhold til justeringsanordningen på forskellige modeller af fluorescensmikroskoper.
4. Placer prøvestykket og observer efter fokusering. Vær opmærksom under brug: observer ikke direkte med endefilteret, for ikke at forårsage øjenskade; når du observerer prøver med en olielinse, skal du bruge en speciel olielinse uden fluorescens; efter at højtrykskviksølvlampen er slukket, kan den ikke tændes igen med det samme, den skal testes. Den kan genstartes efter 5 minutter, ellers vil den være ustabil og påvirke kviksølvlampens levetid.
(3) Observation Ved hjælp af et blåviolet lysfilter under et fluorescerende mikroskop på undervisningsplatformen kan det ses, at o. 01 procent af cellerne farvet med acridinorange fluorescerende farvestof, kernen og cytoplasmaet er begejstrede for at producere to forskellige farver af fluorescens (mørkegrøn og orangerød).
