Brug af fluorescensmikroskopi: teknikker og færdigheder
Fluorescensmikroskop tekniske parametre 1. Vidvinkelokular 2. Akromatisk objektivlinse 3. Objektivlinsekonverter med fire huller 4. Epi-fluorescerende enhed Blå (B) Grøn (G) excitationssystem 100W kviksølvlampe 5. Koaksial grov- og finfokusjusteringsmekanisme: justering Fokusområde: 15 mm Mikrobevægelsesgitterværdi: 0,002 mm 6. Dobbeltlags mekanisk bord Længdebevægelsesområde: 70 mm Sidebevægelsesområde: 50 mm
Brug færdighedsmetoden
(1) Glasglas
Tykkelsen af glaspladen skal være mellem 0,8 og 1,2 mm. Et objektglas, der er for tykt, vil på den ene side absorbere mere lys, og på den anden side kan excitationslyset ikke koncentreres på prøven. Slides skal være glatte, ensartede i tykkelse og fri for tydelig autofluorescens. Nogle gange bruges kvartsglasglas.
(2) Dækglas
Tykkelsen af dækglasset er ca. 0.17 mm, glat. For at forstærke excitationslyset kan der også bruges et interferensdækglas, som er et specielt dækglas belagt med flere lag af stoffer (såsom magnesiumfluorid), der har forskellige interferenseffekter på lys af forskellige bølgelængder, hvilket kan gøre at fluorescens går glat. Spændende lys føres igennem og reflekteres, og dette reflekterede excitationslys exciterer prøven.
(3) Prøve
Vævsskiver eller andre prøver må ikke være for tykke. Hvis det er for tykt, vil det meste af excitationslyset blive forbrugt i den nederste del af prøven, mens den øverste del, som direkte observeres af objektivlinsen, ikke vil blive helt exciteret. Derudover påvirker celleoverlapning eller urenhedsdækning vurderingen.
(4) Monteringsmiddel
Glycerin bruges almindeligvis som et monteringsmiddel, som ikke må have nogen autofluorescens, farveløst og gennemsigtigt, og lysstyrken af fluorescensen er lysere ved pH 8.5-9.5, og det er ikke let at falme hurtigt. Derfor bruges en ensartet blanding af glycerol og 0.5mol/l carbonatbufferopløsning med en pH på 9.0 til 9.5 almindeligvis som monteringsmiddel.
(5) spejlolie
Ved observation af prøver med mørkfeltsfluorescensmikroskoper og olieimmersionslinser skal der generelt anvendes immersionsolie. Det er bedst at bruge speciel ikke-fluorescerende immersionsolie. Ovenstående glycerin kan også bruges i stedet, og flydende paraffin kan også bruges, men brydningsindekset er lavt, hvilket har en lille indvirkning på billedkvaliteten. Indflydelse.
