Hvad er fordelene ved konfokal lasermikroskopi
Sammenlignet med traditionelle bredfeltsmikroskoper har laserscanningskonfokalmikroskopi karakteristika af høj opløsning, høj opløsning og høj følsomhed. Det er meget udbredt inden for biomedicin og er blevet et vigtigt billeddannende værktøj på dette område. Hvorfor kan confocal få så meget kærlighed, og hvilke fordele har det? Denne artikel oplister tre aspekter for at diskutere fordelene ved konfokal.
Saml kun signalet på brændplanet, hvilket gør billedet klart fra sløring
Så hvordan opnår konfokal mikroskopi denne fordel? Dette skyldes den konfokale nøglehardware - nålehullet, som vist i figur 2. Det er et lille hul foran detektoren og placeret på det optiske plan konjugat til prøvens brændplan. Når excitationslyset bestråler prøven, vil både brændplanet og ikke-brændplanet af prøveområdet blive exciteret for at generere fluorescenssignaler, juster den passende pinhole-størrelse (normalt 1 Au), så fluorescenssignalet på brændplanet (grøn stiplet linje) kan være fluorescerende signaler (røde og blå stiplede linjer), der passerer gennem nålehullet for at nå detektoren ud af brændplanet, kan ikke nå detektoren gennem nålehullet. Ved at tilføje hardwarenålehuller kan konfokalen opnå klare billeder af høj kvalitet uden at ændre metoden til fremstilling af almindelige fluorescensmikroskoper.
På grund af eksistensen af nålehullet kan vi kun opnå signalet på brændplanet og opnå et højopløseligt todimensionalt billede. Ved kontinuerlig justering af Z-aksepositionen kan der opnås todimensionelle billeder ved forskellige Z-aksepositioner, og en række kontinuerlige "optiske skive"-billeder kan opnås. Efter at have opnået disse optiske skiver, kan 3D-modulet udstyret med instrumentsoftwaren bruges til at rekonstruere 3D-billedet for at konstruere et klart 3D-billede. Denne ikke-destruktive, kontinuerlige samling af optiske skivebilleder realiserer funktionen af "celle-CT".
Nøjagtigheden af kolokaliseringsresultater er tæt forbundet med opløsningen af billedet, så vi er nødt til at vælge en billedbehandlingsmetode med højere opløsning, når vi udfører kolokaliseringseksperimenter. Sammenlignet med traditionelle mikroskoper er konfokalmikroskopi blevet et stærkt værktøj til kolokaliseringsforskning på grund af dets højopløsningsfordele.
På grund af eksistensen af diffraktionsgrænsen er den konventionelle konfokale optiske opløsning omkring 200 nm. Når vi skal observere strukturer større end 200nm, kan konfokal nøjagtigt bestemme graden af kolokalisering. Hvis kolokaliseringsanalyse er påkrævet, kan kolokaliseringsanalysemodulet, der er udstyret i konfokalsoftwaren, vælges.
