Hvad er prøvekravene til lysmikroskopi?
I prøveforberedelsesprocessen i det optiske mikroskop er tykkelsen af prøvestykket mellem 2 og 25 um; tykkelsen af skiven af elektronmikroskopet er inden for 50-100nm (bortset fra højspændingselektronmikroskopet kan tykkelsen af prøven nå 1um), så den anvendte udskæringsmetode er ikke den samme.
Med hensyn til bæreren er bæreren af den optiske mikroskopsektion et objektglas, og bæreren af elektronmikroskopsektionen er bærergitteret.
Med hensyn til fiksering fikseres optiske mikroskopsektioner med et sammensat fikseringsmiddel, mens elektronmikroskopsektioner gentagne gange fikseres med et enkelt fikseringsmiddel.
Med hensyn til farvning er farvningen af optiske prøver relativt enkel. Ifølge forskellige observationsprøver og typen af optisk mikroskop er det normalt nok at bruge nogle faste pletter. Der er mange metoder til genfarvning af elektronmikroskopprøver, og de er også meget komplicerede, såsom negativ farvning, sølvfarvning og så videre.
Med hensyn til indstøbning anvendes paraffin, collodion, gelatine osv. som indlejringsmidler til optiske mikroskopsnit; epoxyharpiks, polystyrenharpiks, isobutylenharpiks og vandopløselig harpiks anvendes som indlejringsmidler til elektronmikroskopsektioner.
For at få mikroskopets synsfelt til at modtage ensartet og tilstrækkelig belysning, er det nødvendigt at justere det optiske vejsystem for belysning, når mikroskopet først installeres og fejlfindes. krav. Derudover er korrekt greb om justeringen af det optiske vejsystem for belysning et nødvendigt trin efter udskiftning af pæren i processen med at bruge mikroskopet, og det er også et nødvendigt middel til at teste mikroskopets ydeevne fra tid til anden i daglig brugsproces. Justeringen af mikroskopbelysningens optiske vejsystem omfatter hovedsageligt følgende 4 punkter: 1. Foreløbig justering af lyskildens lampekammer uden for mikroskopet ① Åbn først lampekammerets skal, og sæt halogenpæren i soklen ved at trykke på fjederklippet. Snavs såsom fingeraftryk efterladt på pæren vil påvirke pærens levetid. ②Placer lamperummet på bordet, efter at have tændt for strømmen, brug en speciel skruetrækker til at justere lampens fokuseringsknaphul (markeret med "←→"), så glødetråden projiceres på væggen 1-2 m væk, og filamentbilledet justeres. Juster derefter lampens højde for at justere glødetrådshullet (markeret med "──") for at gøre glødetrådspositionen passende; juster derefter de venstre og højre positionsjusteringsskruehuller på lampen (markeret med "──") for at gøre den venstre og højre position af glødetråden passende.
2. Formålet med inspektionen og korrektionen af lyskildebelysningsinstrumentets (glødetråds) position i mikroskopet er at justere billedenden af belysningsinstrumentet til objektivlinsens synsfelt og sikre, at synsfeltet af mikroskopet er fuldt og ensartet modtaget fra lyskildens perspektiv. Belysning, som er en forudsætning for justering af Kühler lysanlæg. Grundlæggende nødvendige værktøjer: Centreringsteleskoper er udstyret med mikroskopkøb. ① Tag den matte glaskappe ud af lampehuset og sæt lampehuset tilbage på mikroskopet ② Vælg en 10× objektivlinse, tænd lyskildeprogrammet for at finde prøven og juster fokus tydeligt, og brug derefter et 40× objektiv linse til at fokusere prøven klart (40× objektivlinse Hele billedet af filamentet kan ses tydeligt); ③ Åbn både åbningsmembranen og feltmembranen på kondensatoren maksimalt; ④ Tag stikket ud af et af okularerne, udskift det med et centrerende teleskop, tag fat i den hvide del, og træk det sorte okular ud med den anden hånd. Filamentbilledet kan ses i synsfeltet; ⑤Hvis glødetrådspositionen ikke er egnet, skal du justere "──"-hullet, justere glødetrådsbilledet i vandret retning, justere "──"-hullet og justere glødetrådsbilledet i lodret retning indtil Juster glødetrådsbilledet til et cirkulært billede, der bare fylder objektivets blændeåbning; ⑥ Efter justeringen skal du indsætte den matte glaskappe tilbage til dens oprindelige position, tage stikket ud af centreringsteleskopet, og udskifte okularet til næste justering. Ovennævnte justering af belysningslyskildelamperummet uden for mikroskopet og kalibreringen af lyskildebelysningsinstrumentets position inde i mikroskopet behøver kun at udføres, når mikroskopet er installeret og fejlrettet for første gang, og pæren er erstattet. I tilfælde af forvirring kan du gendanne den til den oprindelige tilstand i henhold til ovenstående trin.
3. Korrekt justering af Kohler belysningssystemet (Kohler) Korrekt justering af mikroskopet, en af hovedopgaverne er justeringen af belysningens lysbanesystem, og nøglen er justeringen af Kohler belysningssystemet. For alle, der bruger mikroskoper, især dem, der tager mikroskoper, bør de have en vis forståelse og beherskelse af principperne for Kühler belysningssystemet og dets justeringstrin, så de kan give fuldt udspil til mikroskopets funktioner. De resulterende billeder kan være mere konsistente og perfekte i effekt. Princippet i Kühler belysningssystemet er ganske enkelt: lyset, der udsendes af ethvert punkt på lyskildebelysningsinstrumentet, kan oplyse mikroskopets synsfelt, og lyset, der udsendes af hvert punkt på lyskildebelysningsinstrumentet, opsamles, og det er i mikroskopets synsfelt. Der opnås en meget tilstrækkelig og ensartet belysning. Formålet med at justere Kuhler-belysningssystemet er at opnå ensartet og tilstrækkelig belysning til det observerede synsfelt og at forhindre, at strølys påvirker eller interfererer med billeddannelsessystemet, for at undgå dannelse af tåge på negativet under fotografering. Væsentlige komponenter i et højtjusteret Kühler-belysningssystem: feltblænde, kondensatorsystem med aksejustering. ① Vælg 10× objektivlinse og 10× okular ② Sæt kondensatorens frontlinse ind i den optiske bane, juster blændeblænden til en moderat position (ikke for stor eller ikke for lille), og løft derefter kondensatoren til toppositionen, og juster kondensatorpladen til lysfelt "J" position ③ Juster feltmembranen til minimum (0,1)
④ Sæt den forseglede biologiske prøve på scenen, tænd for lyskilden, og fokuser klart
⑤ Et lokalt oplyst område eller lys plet vil dukke op i synsfeltet, som er et sløret billede af feltblænden, hvor detaljerne i prøven tydeligt kan ses; Se detaljerne i prøven tydeligt
⑥ Sænk kondensatoren lidt, så det lyse punkt i synsfeltet gradvist indsnævres og gradvist bliver til et klart polygonalt billede, som er det klare billede af feltmembranen;
⑦ Under normale omstændigheder er det polygonale billede ikke i centrum af synsfeltet. Det er nødvendigt at justere et par centreringsskruer på kondensatoren for at justere det polygonale billede af synsfeltet til midterpositionen;
⑧ Åbn gradvist synsfeltsmembranen for at få det polygonale billede til at blive en indskrevet polygon i synsfeltet, og kontroller yderligere tilpasningstilstanden. Hvis justeringen ikke er ideel, skal du fortsætte med at justere justeringsskruen lidt;
⑨ Åbn feltblænden lidt for at få det polygonale billede til at forsvinde på kanten af synsfeltet. På dette tidspunkt er justeringen af Kühler-lyssystemet afsluttet. Efter at Kühler-belysningssystemet var blevet justeret, blev hele synsfeltet belyst jævnt, og mikrofotografierne var lyse og klare med normal kontrast.
