Hvilke prøvespecifikationer er nødvendige for lysmikroskopi?
I prøveforberedelsesprocessen i det optiske mikroskop er skivetykkelsen af prøven mellem 2-25um; skivetykkelsen af elektronmikroskopet er inden for 50-100nm (undtagen højspændingselektronmikroskopet, hvis prøvetykkelse kan nå 1um), så den anvendte skivemetode er ikke ens.
Med hensyn til bærer er bæreren af den optiske mikroskopsektion et objektglas, mens bæreren for elektronmikroskopsektionen er gitter.
Med hensyn til fiksering fikseres skiverne af det optiske mikroskop med et sammensat fiksativ, mens skiverne af elektronmikroskopet fikseres gentagne gange med et enkelt fikseringsmiddel.
Med hensyn til farvning er farvningen af optiske prøver relativt enkel. Ifølge forskellige observationsprøver og typer af optiske mikroskoper er det normalt nok at farve med nogle faste farvningsmidler. Der er mange og komplicerede metoder til genfarvning af elektronmikroskopprøver, såsom negativ farvning, sølvfarvning og så videre.
Med hensyn til indstøbning anvendes paraffin, kollodium, gelatine osv. som indlejringsmidler til optiske mikroskopsnit; epoxyharpiks, polystyrenharpiks, isobutylenharpiks og vandopløselig harpiks bruges som indlejringsmidler til elektronmikroskopsektioner.
For at sikre, at mikroskopets synsfelt kan være jævnt og fuldt belyst, skal det optiske belysningssystem justeres, når mikroskopet først installeres og fejlfindes. Dette er et vigtigt middel og den mest basale måde at bruge mikroskopet korrekt og opnå korrekte og pålidelige resultater. krav. Derudover er korrekt beherskelse af justeringen af det optiske vejsystem for belysning et nødvendigt trin efter udskiftning af lyskildepæren under brugen af mikroskopet, og det er også et nødvendigt middel til at kontrollere mikroskopets ydeevne fra tid til anden i løbet af dagligt brug. Justeringen af mikroskopbelysningens optiske vejsystem omfatter hovedsageligt følgende fire punkter: 1. Foreløbig justering af lyskildelampekammeret uden for mikroskopet ① Åbn lampekammerets skal først, tryk på fjederklemmen for at sætte halogenpæren i fatning, og undgå direkte kontakt med pæren med fingrene under installationen (kan adskilles med blød klud eller papir) for at undgå Der er fingeraftryk og andet snavs på pæren, som vil påvirke pærens levetid. ②Sæt lampehuset på bordet, efter at have tændt for strømmen, brug en speciel skruetrækker til at justere lampens fokusknaphul (markeret med "←→"), så glødetråden projiceres på væggen 1-2 m væk, og filamentbilledet justeres. Juster derefter lampens højde og juster gevindhullet (markeret med "──") for at gøre positionen af glødetråden passende; juster derefter lampens venstre og højre position for at justere skruehullet (markeret med "──") for at gøre den venstre og højre position af glødetråden passende .
2. Formålet med at kontrollere og korrigere lyskildebelysningsmidlets (glødetrådens) position i mikroskopet er at justere billedenden af belysningsmidlet vinkelret ind i objektivlinsens synsfelt, og at sikre at synsfeltet pr. mikroskopet er fuldt og ensartet belyst fra lyskildens perspektiv. Belysning, som er en forudsætning for justering af Kuhler lysanlæg. Grundlæggende nødvendige værktøjer: Centreringsteleskopet er udstyret, når mikroskopet købes. ① Tag den matte glaskappe ud af lampehuset, og sæt lampehuset tilbage på mikroskopet. ② Vælg en 10× objektivlinse, tænd lyskildeprogrammet for at finde prøven og fokuser den tydeligt, og brug derefter en 40× objektivlinse til at fokusere prøven klart (40× objektivlinse Du kan se hele billedet af glødetråden) ); ③ Åbn kondensatorens blændemembran og feltmembran maksimalt; ④ Træk stikket ud af et af okularerne, udskift med et centrerende teleskop, tag fat i den hvide del, stræk det sorte okular med den anden hånd. Du kan se filamentbilledet i synsfeltet; ⑤ Hvis positionen af filamentet ikke er passende, skal du justere "──"-hullet for at justere filamentbilledet i vandret retning, og justere "──"-hullet for at justere filamentbilledet i lodret retning, indtil Juster filamentbilledet til det lette cirkulære billede, der netop fylder objektivets blændeåbning; ⑥ Efter justeringen, indsæt den mattede glasmuffe tilbage til den oprindelige position, tag stikket ud af centreringsteleskopet, og udskift okularet til næste justering. Ovennævnte justering af belysningslyskildens lampekammer uden for mikroskopet og verifikationen af lyskildens lyslegemes position inde i mikroskopet behøver kun at udføres, når mikroskopet først installeres og fejlfindes, og når pæren udskiftes , og mikroskopet kan ikke justeres tilfældigt ved brug af mikroskopet. I tilfælde af forvirring kan den justeres tilbage til den oprindelige tilstand i henhold til ovenstående trin.
3. Korrekt justering af Kohler-belysningssystemet En af hovedopgaverne ved den korrekte justering af mikroskopet er justeringen af belysningens optiske vejsystem, og nøglen er justeringen af Kohler-belysningssystemet. For enhver person, der bruger et mikroskop, især dem, der laver mikrofotografier, bør de have en vis forståelse og beherskelse af princippet om Kuhler-belysningssystemet og dets justeringstrin for at give fuldt spil til mikroskopets funktioner og tage billeder. De billeder, der kommer ud, kan være mere konsistente og perfekte i effekt. Princippet i Kohler-belysningssystemet er ganske enkelt: lyset, der udsendes af ethvert punkt på lyskildens lyskilde, kan oplyse mikroskopets synsfelt, og lyset, der udsendes af hvert punkt på lyskildens lyskilde, opsamles og i feltet. af mikroskopet En meget fuld og ensartet belysning opnås. Formålet med at justere Kuhler-belysningssystemet er at opnå ensartet og tilstrækkelig belysning til det observerede synsfelt, og at forhindre strølys i at påvirke eller forstyrre billeddannelsessystemet, for at undgå dug på filmen under fotografering. Nødvendige komponenter til et højjusteret Kohler-belysningssystem: feltblænde, kondensatorlinsesystem, der kan justeres på aksen. ① Vælg 10× objektivlinse og 10× okular ② Sæt kondensatorens frontlinse ind i den optiske bane, juster blændeblænden til en moderat position (ikke for stor eller lille), og løft derefter kondensatoren til øverste position, og juster kondensatorpladen til lysfelt "J" position ③ Juster feltmembranen til minimum (0,1)
④ Sæt den forseglede biologiske prøve på scenen, tænd for lyskilden, og fokuser klart
⑤ Der vil være et delvist oplyst område eller et lyst punkt i synsfeltet, som er det slørede billede af feltmembranen, hvor detaljerne i prøven tydeligt kan ses; udenfor er det et mørkere synsfelt, som måske ikke nødvendigvis ser detaljerne i prøven tydeligt
⑥ Juster kondensatoren lidt nedad, så det lyse punkt i synsfeltet gradvist krymper og gradvist bliver et klart polygonalt billede, som er det klare billede af feltblænden;
⑦ Generelt er det polygonale billede ikke i midten af synsfeltet, og det er nødvendigt at justere et par centreringsskruer på kondensatoren for at justere det polygonale billede af feltmembranen til den centrale position;
⑧Åbn gradvist synsfeltets membran for at gøre polygonbilledet til en indskrevet polygon i synsfeltet, og tjek yderligere justeringsstatussen. Hvis justeringen ikke er ideel, skal du fortsætte med at finjustere justeringsskruen;
⑨Åbn membranen af synsfeltet lidt, så dets polygonale billede lige forsvinder på kanten af synsfeltet. Indtil videre er justeringen af Kohler-belysningssystemet afsluttet. Efter at Kohler-lyssystemet er justeret, er hele synsfeltet jævnt belyst, og de taget mikrofotografier er lyse og klare med normal kontrast.
