Hvorfor skal du bruge et konfokalmikroskop?
1. Optiske mikroskoper har nået en tilstand af perfektion gennem indsatsen og forbedringerne fra vores store forgængere. Faktisk kan almindelige mikroskoper give os smukke mikroskopiske billeder enkelt og hurtigt. Der indtraf imidlertid en begivenhed, der bragte revolutionerende innovation til denne næsten perfekte verden af mikroskopi. Dette var opfindelsen af "laser scanning konfokal mikroskop." Kendetegnet ved denne nye type mikroskop er, at den bruger et optisk system, der kun udtrækker billedinformation på overfladen, hvor fokus er fokuseret, og gendanner den opnåede information i billedhukommelsen, mens fokus ændres, og derved opnår komplet 3D-information. Et levende billede af intelligens. Gennem denne metode kan information om overfladeformen, som ikke kan bekræftes med et normalt mikroskop, let opnås. For almindelige optiske mikroskoper er "øgende opløsning" og "uddybning af fokusdybden" desuden modstridende forhold, især ved høje forstørrelser. Men i konfokal mikroskopi er dette problem let at løse.
2. Fordele ved konfokalt optisk system
Det konfokale optiske system udfører punktbelysning på prøven, og det reflekterede lys bruger også en punktreceptor til at modtage lyset. Når prøven placeres i fokuspositionen, kan næsten alt det reflekterede lys nå fotoreceptoren. Når prøven er ude af fokus, kan det reflekterede lys ikke nå fotoreceptoren. Med andre ord, i det konfokale optiske system vil kun det billede, der falder sammen med fokus, blive udsendt, og lyspletterne og ubrugeligt spredt lys vil blive afskærmet.
3. Hvorfor bruge laser?
I det konfokale optiske system belyses prøven i et punkt, og det reflekterede lys modtages også ved hjælp af en punktfotoreceptor. Derfor bliver punktlyskilder nødvendige. Lasere er meget punktlyskilder. I de fleste tilfælde bruger lyskilden til konfokale mikroskoper laserlyskilder. Derudover er egenskaberne ved laser såsom monokromaticitet, retningsbestemmelse og fremragende stråleform også vigtige grunde til dens udbredte anvendelse.
4. Realtidsobservation baseret på højhastighedsscanning bliver mulig
Til laserscanning anvendes en akustisk optisk deflektor (AO-element) i vandret retning og et servo elektrisk styret strålescanningsspejl (Servo Galvano-spejl) i vertikal retning. Da den akustisk-optiske afbøjningsenhed ikke har en mekanisk vibrationsdel, kan den scanne ved høj hastighed, hvilket gør realtidsobservation mulig på overvågningsskærmen. Den høje hastighed af denne form for billeddannelse er et meget vigtigt element, der direkte påvirker hastigheden af fokusering og positionssøgning.
5. Forholdet mellem fokusposition og lysstyrke
I det konfokale optiske system er lysstyrken maksimal, når prøven er korrekt placeret i fokuspositionen, og dens lysstyrke vil falde kraftigt foran og bagved (helttrukket linje i figur 4). Denne følsomme selektivitet af brændplanet er også princippet bag højderetningsbestemmelsen og fokusdybdeudvidelsen af det konfokale mikroskop. I modsætning hertil har et normalt optisk mikroskop ikke tydelige lysstyrkeændringer før og efter fokuspositionen (stiplet linje i figur 4).
6. Høj kontrast og høj opløsning
I almindelige optiske mikroskoper vil det reflekterede lys fra den ude af fokus del interferere og overlappe med fokus billeddannelsesdelen, hvilket resulterer i en reduktion i billedkontrasten. I modsætning hertil er strølys uden for fokus og strølys inde i objektivlinsen næsten helt fjernet i det konfokale optiske system, så der kan opnås et billede med meget høj kontrast. Fordi lyset passerer gennem objektivlinsen to gange, skærpes punktbilledet desuden, hvilket også forbedrer mikroskopets opløsningsevne.
