Biologisk prøveforberedelse og observation ved hjælp af elektronmikroskoper
Opløsning af et mikroskop afhænger af bølgelængden af det anvendte lys. Elektronmikroskopet, der opstod i 1933, anvender elektronstråler med en meget kortere bølgelængde end synligt lys som lyskilde. Dette forbedrer opløsningen betydeligt sammenlignet med optiske mikroskoper. Forskelle i lyskilder fører også til en række skel mellem elektronmikroskoper og optiske mikroskoper.
Baseret på forskelle i principper for afbildning af elektronstråler og måder, hvorpå strålen interagerer med prøver, har moderne elektronmikroskoper udviklet sig til mange typer. De mest almindeligt anvendte er transmissionselektronmikroskoper (TEM) og scanningselektronmikroskoper (SEM). Den samlede forstørrelse af TEM kan variere fra 1.000 til 1.000.000 gange, mens forstørrelsen af SEM varierer fra 20 til 300.000 gange. Dette eksperiment introducerer hovedsageligt prøveforberedelse til transmissionselektronmikroskoper og scanningselektronmikroskoper.
II. Apparater og materialer
Stamme:Escherichia coliskrå kultur
Opløsninger og reagenser: Formvar, koncentreret svovlsyre, absolut ethanol, sterilt vand, 2 % vandig natriumphosphowolframatopløsning (pH 6,5–8,0), 0,3 % polyvinylformal opløsning (opløst i chloroform), cytokrom C, ammoniumacetat, plasmid pBR322.
Instrumenter og forsyninger: Konventionelt optisk mikroskop, kobbergitre, Buchner-tragt, bægerglas, petriskål, steril dråbepind, steril pincet, dissekeringsnål, glasskive, hæmocytometer, vakuumfordamper, kritisk punkttørrer osv.
III. Driftsprocedurer
(1) Prøveforberedelse og observation til transmissionselektronmikroskopi
Behandling af metalgitre Prøver til optisk mikroskopi observeres på objektglas. Men til transmissionselektronmikroskopi kan elektroner ikke trænge ind i glas, så mesh-substrater, almindeligvis kendt som prøvegitter, bruges i stedet. Prøvegitter fås i forskellige specifikationer alt efter materiale og form. Kobbergitter på 200-400 mesh er de mest udbredte. Kobbergitre skal rengøres før brug for at fjerne forurenende stoffer, ellers vil kvaliteten af støttefilm og klarheden af prøvemikrofotografier blive påvirket. Dette eksperiment anvender 400-mesh kobbergitre, behandlet som følger: læg først i blød i Formvar-opløsning i flere timer, skyl gentagne gange med destilleret vand, og dehydrer derefter ved iblødsætning i absolut ethanol. Hvis gitrene forbliver snavsede efter ovenstående trin, skal du lægge dem i blød i fortyndet koncentreret svovlsyre (1:1) i 1-2 minutter, eller kog dem i 1 % NaOH-opløsning i flere minutter. Skyl grundigt med destilleret vand, dehydrer i absolut ethanol og sæt til side til senere brug.
