Sådan justeres laserintensiteten af et laserscanningskonfokalmikroskop
① Strømkontrolknap: Sæt generelt til 30 % af den maksimale værdi. Højere output forkorter laserens levetid og introducerer laserstøj. Optimer intensiteten ved at justere AOTF, PMT og andre komponenter først.
② Acousto-Optic Tunable Filter (AOTF): Det styrer excitationslysstrålen og intensiteten. Den kan tænde eller slukke for laseren inden for millisekunder eller justere laserintensiteten kontinuerligt fra 0 til 100 %. Dette gør det muligt at anvende forskellige laserstråler og udvalgte intensitetsværdier på hver pixel i billedet.
Arbejdsprincip: Den er afhængig af Bragg-diffraktion af indfaldende lys induceret af akustiske bølger, der forplanter sig i mediet. Når et RF-signal med en specifik frekvens indlæses, diffrakterer AOTF det indfaldende polykromatiske lys og vælger monokromatisk lys med bølgelængden λ. Der er en en-til-en overensstemmelse mellem bølgelængden af det valgte monokromatiske lys og radiofrekvensen f. Udgangsbølgelængden kan ændres hurtigt og tilfældigt ved blot at indstille det elektriske signal. AOTF muliggør kontinuerlig laserintensitetsjustering med hurtig respons til lokal stimulering, scanning og hurtig bølgelængdeskift på mikrosekundniveau.
I et konfokalt laser-scanningsmikroskop kan fotomultiplikatorrøret (PMT) ikke øge laserintensiteten, men det justerer den fotoelektriske signalintensitet for det endelige billede. Derfor ændrer justering af spændingen af fotomultiplikatorrøret billedets lysstyrke. Derudover påvirker størrelsen af det konfokale nålehul fotonantal og kan også bruges til at justere billedets lysstyrke. Fotomultiplikatorrøret er et specielt vakuumrør, der er ekstremt følsomt over for ultraviolet, synligt og nær-infrarødt lys. Den forstærker svage indkommende optiske signaler op til 10⁸ gange, så lyssignalerne kan måles.
