Betjeningsvejledning og forholdsregler for fluorescensmikroskop
Fluorescensbilleder observeret under et fluorescensmikroskop har morfologiske karakteristika såvel som fluorescensfarve og lysstyrke. Begge faktorer skal kombineres for en omfattende resultatevaluering. Resultatregistrering er afhængig af subjektive indikatorer baseret på visuel observation fra operatører, hvilket generelt er pålideligt til rutinemæssig kvalitativ observation. Med fremskridt inden for teknologi bruges objektive instrumenter såsom mikrospektrofotometre og billedanalysatorer i stigende grad til dokumentation og evaluering. Ikke desto mindre kræver resultater opnået fra disse instrumenter stadig subjektiv fortolkning.
Fotografering med et fluorescensmikroskop er afgørende for at dokumentere fluorescensbilleder. Da fluorescens falmer hurtigt, skal resultaterne fotograferes med det samme. Fremgangsmåden er stort set den samme som konventionel fotomikrografi, bortset fra at højhastighedsfotografiske film af ASA 200 eller højere er påkrævet. Ultraviolet lys forårsager alvorlig fluorescensfotoblegning. For eksempel mister FITC-mærkede prøver 50 % af deres fluorescenslysstyrke efter 30 sekunders UV-bestråling. Derfor vil langsom eksponering ikke optage fluorescensbilleder. De fleste fluorescensmikroskoper af forskningskvalitet er udstyret med semi-automatiske eller fuldautomatiske fotomikrografisystemer.
Forholdsregler
① Arbejd nøje i overensstemmelse med producentens manual for fluorescensmikroskopet; ændre ikke driftsprocedurer vilkårligt. ② Observationer skal udføres i et mørkekammer. Når du er kommet ind i mørkerummet, skal du tænde for strømmen og tænde højtrykskviksølvlampen i 5-15 minutter. Start prøveobservation først, når lyskilden har stabiliseret sig, og dine øjne tilpasser sig fuldt ud til mørket.
③ Beskyt dine øjne mod ultraviolet stråling. Bær beskyttelsesbriller, når du justerer lyskilden.
④ Hver observationssession anbefales at vare 1-2 timer. Lysstyrken af ultrahøjtrykskviksølvlampen falder gradvist efter 90 minutter, og fluorescensen svækkes tilsvarende. Fluorescens af prøver falmer også mærkbart efter 3-5 minutters UV-eksponering. Den maksimale kontinuerlige observationstid må ikke overstige 2-3 timer.
⑤ Levetiden for fluorescensmikroskopets lyskilde er begrænset. Undersøg prøver i batcher for at spare tid og forlænge lampens levetid. Brug en elektrisk ventilator til varmeafledning i varme omgivelser. Registrer driftstiden helt fra begyndelsen efter lampeskift. Hvis lampen går ud, skal du vente, indtil den er afkølet helt, før den tændes igen. Undgå hyppig genstart af lampen.
⑥ Observer farvede prøver umiddelbart efter farvning, da fluorescens vil falme over tid. Prøver kan opbevares ved 4 grader i polyethylenplastikposer for at bremse nedbrydning af fluorescens og forhindre fordampning af monteringsmediet.
⑦ Graderingsstandard for fluorescensintensitet: fire grader anvendes generelt: "−": Ingen fluorescens eller kun svag fluorescens detekterbar "+": Næppe detekterbart, men bestemt fluorescenssignal "++": Lys fluorescens synlig
