Forberedelse og observation af biologiske prøver til elektronmikroskoper
Opløsningen af et mikroskop afhænger af bølgelængden af det anvendte lys. Elektronmikroskopet, som opstod i 1933, opnåede væsentlig højere opløsning end et optisk mikroskop på grund af brugen af elektronstråler med bølgelængder meget kortere end synligt lys som lyskilder. De forskellige lyskilder bestemmer også en række forskelle mellem elektronmikroskoper og optiske mikroskoper.
Baseret på forskellene i principperne for elektronstråleafbildning og de måder, hvorpå de virker på prøver, har moderne elektronmikroskoper udviklet sig til mange typer. I øjeblikket er de mest almindeligt anvendte transmissionselektronmikroskoper og scanningselektronmikroskoper. Førstnævnte har en samlet forstørrelse, der kan variere mellem 1000-10000000 gange, mens sidstnævnte har en samlet forstørrelse, der kan variere mellem 20-300000 gange. Dette eksperiment introducerer hovedsageligt fremstillingen af to typer mikroskopprøver, transmissionselektronmikroskopi og scanningselektronmikroskopi.
2, Udstyr
1. Stammen Escherichia coli er tilbøjelig.
2. Opløsning eller reagens: pentylacetat, koncentreret svovlsyre, vandfri ethanol, sterilt vand, 2% natriumphosphowolframat (pH 6,5-8,0) vandig opløsning, 0,3% polyvinylformaldehyd (opløst i chloroform) opløsning, pBR3, 2plasmidacetat, 2plasmidacetat.
3. Instrumenter eller andre værktøjer omfatter almindelige optiske mikroskoper, kobbernet, porcelænstragte, bægerglas, petriskåle, sterile dråber, sterile pincet, stifter, glasobjektglas, tælleplader, vakuumbelægningsmaskiner, kritiske punkttørrere mv.
3, Driftstrin
(1) Forberedelse og observation af prøver til transmissionselektronmikroskopi
1. Behandling af metalnet
Prøven af et optisk mikroskop placeres på et objektglas til observation. Men i et transmissionsspejl, da elektroner ikke kan trænge ind i glaspladen, kan et netmateriale kun bruges som bæreren, almindeligvis omtalt som et bærenet. Bærenettet kan opdeles i forskellige specifikationer på grund af forskellige materialer og former, blandt hvilke kobbernet med 200-400 mesh (antal huller) er almindeligt anvendt. Kobbernet skal behandles før brug for at fjerne alt snavs og holde det rent, ellers vil det påvirke kvaliteten af den understøttende film og klarheden af prøvebillederne. De 400 mesh kobbermasker, der blev brugt i dette eksperiment, kan behandles ved hjælp af følgende metode: først gennemblød og flyd med pentylacetat i et par timer, skyl derefter flere gange med destilleret vand, og nedsænk og flyd til sidst kobbernettet i vandfri ethanol til dehydrering. Hvis kobbernettet stadig ikke er rent efter ovenstående metoder, kan det lægges i blød i fortyndet koncentreret svovlsyre (1:1) i 1-2 minutter, eller koges i 1% NaOH-opløsning i nogle minutter, skylles flere gange med destilleret vand og derefter dehydreres i vandfri ethanol til senere brug.
