Forberedelse og observation af biologiske prøver til elektronmikroskoper
Opløsningen af et mikroskop afhænger af bølgelængden af det lys, det bruger. Elektronmikroskopet, som opstod i 1933, bruger elektronstråler med en meget kortere bølgelængde end synligt lys som lyskilde. Derfor opnår den en langt højere opløsning end optiske mikroskoper. Forskellen i lyskilder medfører også en række forskelle mellem elektronmikroskoper og optiske mikroskoper.
Baseret på forskelle i principper for afbildning af elektronstråler og måder at interagere med prøver på, har moderne elektronmikroskoper udviklet sig til mange typer. De mest udbredte er transmissionselektronmikroskoper (TEM) og scanningselektronmikroskoper (SEM). Den samlede forstørrelse af førstnævnte varierer fra 1000 til 1.000.000 gange, mens den for sidstnævnte varierer fra 20 til 300.000 gange. Dette eksperiment introducerer hovedsageligt prøveforberedelse til transmissionselektronmikroskoper og scanningselektronmikroskoper.
II. Apparater og reagenser
① Bakteriestamme:Escherichia coliskrå kultur. ② Opløsninger eller reagenser: amylacetat, koncentreret svovlsyre, absolut ethanol, sterilt vand, 2 % natriumphosphowolframat vandig opløsning (pH 6,5–8,0), 0,3 % polyvinylformal (opløst i chloroform) opløsning, cytochrom c, ammoniumplasmid pBR32. ③ Instrumenter og forsyninger: almindeligt optisk mikroskop, kobbergitre, keramisk tragt, bægerglas, petriskål, steril dråbepind, steril pincet, dissektionsnål, glasskive, tællekammer, vakuumfordamper, kritisk punkttørrer osv.
III. Driftsprocedurer
(A) Prøveforberedelse og observation til transmissionselektronmikroskop
① Behandling af metalgitre Prøver til optisk mikroskopi observeres på objektglas. Men til transmissionselektronmikroskopi kan elektroner ikke trænge ind i glasglas, så mesh-materialer kaldet støttegitter bruges som prøvebærere. Støttegitter fås i forskellige specifikationer alt efter materiale og form; kobbergitter på 200–400 mesh er de mest almindeligt anvendte. Kobbergitre skal forrenses før brug for at fjerne forurenende stoffer, ellers vil kvaliteten af den understøttende film og klarheden af prøvemikrofotografier blive påvirket. Et 400-mesh kobbergitter anvendes i dette eksperiment, og behandlingstrinene er som følger: læg først kobbergitteret i blød i amylacetat i flere timer, skyl det flere gange med destilleret vand, og dehydrer det derefter i absolut ethanol. Hvis kobbergitteret stadig er snavset efter ovenstående behandling, læg det i blød i fortyndet koncentreret svovlsyre (1:1) i 1-2 minutter, eller kog det i 1 % NaOH-opløsning i flere minutter. Efter gentagne skylninger med destilleret vand, dehydreres det i absolut ethanol til standbybrug.
