Principper og strukturelle træk ved fluorescensmikroskopi
Fluorescensmikroskop er brugen af en høj lyseffektivitet af punktlyskilden gennem farvefiltreringssystemet til at udsende en vis bølgelængde af lys (såsom ultraviolet 3650 eller violet-blå 4200) som excitationslyset, excitationen af fluorescerende materiale indeni prøven udsender en række forskellige farver af fluorescens og forstørres derefter gennem objektivet og okularerne til observation. På denne måde, i den stærke kontrast baggrund, selvom fluorescensen er meget svag, er det let at identificere, høj følsomhed, hovedsagelig brugt til undersøgelse af cellestruktur og funktion og kemisk sammensætning. Den grundlæggende struktur af et fluorescensmikroskop er sammensat af et almindeligt optisk mikroskop plus noget tilbehør (såsom en fluorescenslyskilde, excitationsfiltre, tofarvet stråleseparator og blokeringsfiltre osv.). Fluorescerende lyskilde - generelt brugt ultrahøjtrykskviksølvlampe (50-200W), som kan udsende en række forskellige bølgelængder af lys, men hvert fluorescerende materiale har en stærkeste fluorescensexcitationsbølgelængde, så behovet for at tilføje excitationsfiltre (generelt ultraviolet, violet, blåt og grønt excitationsfilter), således at kun en vis bølgelængde af excitationslys gennem bestråling af prøver absorberes, mens det andet lys absorberes. Så det er nødvendigt at tilføje et excitationsfilter (normalt ultraviolette, violette, blå og grønne excitationsfiltre), så kun en vis bølgelængde af excitationslys gennem prøven, mens andet lys absorberes. Når hvert stof bestråles med excitationslys, udsender det synlig fluorescens af en længere bølgelængde end det bestrålede lys inden for meget kort tid. Fluorescens har en specificitet, generelt svagere end excitationslyset, for at kunne observere den specifikke fluorescens, i objektivlinsen bag behovet for at tilføje et blokerende (eller undertrykkende) filter.
Dens rolle er todelt:
Den ene er at absorbere og blokere excitationslyset ind i okularet, for ikke at forstyrre fluorescensen og øjenskaden.
Den anden er at vælge og lade den specifikke fluorescens igennem, hvilket viser en specifik fluorescerende farve. De to typer filtre skal vælges og bruges sammen.
