Krav til fremstilling af prøver til fluorescensmikroskopet
(1) Glasglas
Tykkelsen af objektglasset skal være mellem 0,8 og 1,2 mm. Hvis objektglasset er for tykt, vil det på den ene side absorbere mere lys, og på den anden side vil det ikke lade excitationslyset samle sig på prøven. Glaspladen skal være glat, ensartet i tykkelse og ikke have nogen tydelig spontan fluorescens. Nogle gange er der brug for kvartsglasglas.
(2) Dækglasglas
Tykkelsen af dækglasset er ca. 0.17 mm, og det er glat. For at forbedre excitationslys kan interferensdækglas også bruges. Dette er et specialdesignet dækglas med flere lag af stoffer (såsom magnesiumfluorid), der har forskellige interferenseffekter på lys af forskellige bølgelængder. Det kan tillade fluorescens at passere jævnt, mens reflektionsexcitationslys kan excitere prøven.
(3) Prøve
Vævsskiver eller andre prøver må ikke være for tykke. Hvis de er for tykke, forbruges det meste af excitationslyset i den nederste del af prøven, mens den øverste del, der observeres direkte af objektivlinsen, ikke er helt exciteret. Derudover kan celleoverlapning eller urenhedsmaskering påvirke dømmekraften.
(4) Tætningsmiddel
Glycerin er almindeligt anvendt som monteringsmiddel, som ikke må have spontan fluorescens, farveløst og gennemsigtigt. Fluorescenslysstyrken er relativt lys ved pH 8.5-9.5 og er ikke let at forsvinde hurtigt. Derfor er en lige så blanding af glycerol og 0.5mol/lpH9.0-9.5 carbonatbuffer almindeligvis brugt som monteringsmiddel.
(5) Spejlolie
Når du bruger et mørkt felt fluorescensmikroskop og et oliemikroskop til at observere prøver, er det nødvendigt at bruge linseolie. Det er bedst at bruge en specialfremstillet ikke-fluorescerende linseolie, som også kan erstattes med glycerol som nævnt ovenfor. Flydende paraffin kan også bruges, men brydningsindekset er lavt og har en lille indvirkning på billedkvaliteten.
