De særlige strukturer af fluorescensmikroskopet omfatter:
(I) Filtersystem
Filterblokken er en vigtig del af et fluorescensmikroskop. Dens kernekomponenter består af et excitationsfilter (første barrierefilter), et emissionsfilter (andet barrierefilter) og et stråleopdelingsspejl. Modelbetegnelserne og navnene på filtre varierer mellem producenterne.
Excitationsfiltre og emissionsfiltre Baseret på lyskildens og fluorokromernes egenskaber vælges de følgende tre matchende kombinationer almindeligvis. De giver excitationslys inden for et specifikt bølgelængdeområde og transmitterer fluorescens udsendt af prøven til okularet til billeddannelse.
Ultraviolet excitation: Excitationsfilteret transmitterer ultraviolet lys og blokerer synligt lys over 400 nm. Det tilsvarende emissionsfilter tillader blåt lys at passere, hvilket giver et blåt billede i synsfeltet, f.eks. til DAPI-farvning.
Blåt lys excitation: Excitationsfilteret transmitterer blåt lys og blokerer lys af andre bølgelængder. Det tilsvarende emissionsfilter tillader grønt lys at passere, f.eks. til GFP-mærkning.
Grønt lys excitation: Excitationsfilteret transmitterer grønt lys og blokerer lys af andre bølgelængder. Det tilsvarende emissionsfilter tillader normalt rødt lys at passere, f.eks. ved Rhodamine-farvning.
Beam-splitting Mirror Det blokerer fuldstændigt og reflekterer excitationslys, mens det transmitterer emissionslys i det tilsvarende bølgelængdeområde. Dens model er matchet med excitationsfilteret og emissionsfilteret.
(II) Mål og okularer
De fleste mål kan bruges, men apokromatiske, akromatiske mål foretrækkes. De har ekstremt lav autofluorescens og passende transmittans (bølgelængdeområde) til fluorescensapplikationer. Fluorescenslysstyrken af et billede i mikroskopets synsfelt er proportional med kvadratet af objektivets numeriske blænde og omvendt proportional med dets forstørrelse. For at forbedre lysstyrken af fluorescensbilleder bør der anvendes objektiver med en stor numerisk blænde. Specielt for svagt fluorescerende prøver skal du vælge objektiver med stor numerisk blændeåbning og høj lystransmission, parret med okularer med den lavest mulige forstørrelse.
(III) Andre optiske komponenter
Reflekterende spejl: Dets reflekterende lag er normalt aluminiumbelagt. Aluminium har lav absorption for ultraviolet lys og det blå-violette bånd af synligt lys, med en reflektans på over 90 % (sølv når kun omkring 70 %). Plane spejle er generelt vedtaget. Kondensator: Kondensatorer, der er specielt designet til fluorescensmikroskoper, er lavet af kvartsglas eller andet UV-transparent glas. Epi-belysningsenhed: Ud over funktionen af en transmitteret lyskilde er den mere velegnet til direkte observation af uigennemsigtige og semi-transparente prøver såsom tykke skiver, filtermembraner, bakteriekolonier og vævskulturer. Mange nyudviklede fluorescensmikroskoper anvender epi-illuminationssystemer, kendt som epifluorescensmikroskoper.
