Volumenet af vævsprøveblokke
På mikroskoper udstyret med en kondensatorlinse kan du flytte kondensatoren op og ned for at justere lysstyrken til et passende niveau. Derudover kan du ændre blænden på irisblænden for at opnå en passende lysstyrke. Hvis lyset er for svagt, skal du hæve kondensatoren passende og åbne blænden på irisblænden bredere. Hvis lyset er for stærkt, skal du sænke kondensatoren passende og reducere blænden på irisblænden. Skulle lyset stadig være blændende efter disse justeringer, placeres et passende filter på holderen under kondensatoren for at opnå tilfredsstillende belysning. Naturligvis kræver færdigheder i at justere kondensatorens lodrette position, regulering af blænden i irismembranen og valg af passende filtre akkumuleret praktisk erfaring over tid.
Et andet kritisk aspekt af biologisk mikroskopi ligger i procedurerne for materialeprøvetagning og celleisolering. Efter frysetørring (FD), harpiksindlejring og frosset ultratynd sektion, skal der udvises ekstrem omhu for at bevare den elementære sammensætning af alle cellulære komponenter uden at beskadige cellerne, der er beregnet til observation og analyse. Røntgenmikroanalyse involverer komplekse procedurer og høje omkostninger. Det ville være beklageligt at drage fejlagtige konklusioner, hvis cellerne, der undersøges efter langvarig og multi-trins forberedelse, er beskadigede eller ikke-levedygtige. For eksempel præsenterer kardiomyocytter, der er isoleret via kollagenasefordøjelse, to morfologiske former: aflange stavformede celler og runde celler. De runde er beskadigede døende celler skadet under celleisolering.
Indholdet og fordelingen af elektrolytter adskiller sig væsentligt mellem disse to celletyper. Runde kardiomyocytter indeholder ekstremt høje natriumniveauer og meget lave kaliumniveauer, sammen med en markant forhøjet calciumkoncentration i mitokondrierne. Krydsverifikation med andre analytiske metoder bekræfter, at det høje natrium, lavt kalium og højt mitokondrielt calcium i runde celler skyldes beskadigelse af cellemembranen under isolering.
Kryofiksering af celler og væv begynder normalt med dykfrysning, efterfulgt af opbevaring i flydende nitrogen. Dykfrysning er afgørende for konserveringskvaliteten. Levende celler og friskt væv indeholder rigeligt med vand. Under dykfrysning fryser og fikserer de dele af celler eller væv, der kommer i direkte kontakt med kryogenet (især flydende nitrogen), først og danner en frossen skal, der forhindrer hurtig frysning og fiksering af den centrale region af prøven. Som følge heraf observeres iskrystaller ofte i det centrale område af større celler under røntgenmikroanalyse.
For at undgå dette problem anvendes kryogener med et smeltepunkt højere end flydende nitrogen, men alligevel lavere end -80 grader. Blandt forskellige tilgængelige muligheder er flydende propan let at opnå, billigt og tilbyder en ekstremt hurtig afkølingshastighed (kogepunkt: -42,12 grader; smeltepunkt: -187,1 grader; molekylvægt: 44,1). Dens eneste ulempe er brændbarhed.
