Hvorfor skal jeg bruge et konfokalt mikroskop?
1. Det optiske mikroskop er blevet perfektioneret gennem indsatsen og forbedringerne fra vores store forgængere. Faktisk kan det sædvanlige mikroskop nemt og hurtigt give os smukke mikroskopiske billeder. Begivenheden, der revolutionerede verden af næsten perfekte mikroskoper, var opfindelsen af det "laserscanningskonfokale mikroskop". Denne nye type mikroskop er kendetegnet ved et optisk system, der kun udtrækker billedinformation fra overfladen, hvorpå fokus er koncentreret, og ved at ændre fokus samtidig med at den optagne information gendannes i billedhukommelsen, er det muligt at opnå et skarpt billede med fulde 3-dimensionelle oplysninger. På den måde er det nemt at få information om overfladens form, som ikke kan bekræftes med et konventionelt mikroskop. Derudover, mens "øgende opløsning" og "uddybning af fokusdybden" er modstridende betingelser for konventionelle optiske mikroskoper, især ved høj forstørrelse, løses dette problem med konfokale mikroskoper.
2. Fordele ved Confocal Optical System
Skematisk diagram af laserkonfokalmikroskop
Det konfokale optiske system er en punktbelysning af prøven, mens det reflekterede lys også modtages ved hjælp af en punktreceptor. Når prøven er placeret i brændpunktet, når næsten alt det reflekterede lys fotoreceptoren, og når prøven er ude af fokus, kan det reflekterede lys ikke nå fotoreceptoren. Med andre ord, i et konfokalt optisk system udsendes kun det billede, der falder sammen med brændpunktet, og pletter og ubrugeligt spredt lys blokeres ude.
3. Hvorfor bruge en laser?
I et konfokalt optisk system belyses prøven ved et punkt, og det reflekterede lys modtages af en punktsensor. Derfor er en punktlyskilde nødvendig. Lasere er i høj grad en punktlyskilde. I de fleste tilfælde er lyskilden til konfokale mikroskoper en laserlyskilde. Derudover er monokromaticiteten, retningsbestemmelsen og den fremragende stråleform af lasere vigtige grunde til deres udbredte anvendelse.
4. Realtidsobservation baseret på højhastighedsscanning er mulig.
Til laserscanning anvendes en akustisk optisk afbøjningsenhed (Acoustic Optical Deflector, AO prime) i vandret retning, og et servoelektronisk styret strålescanningsspejl (Servo Galvano-spejl) anvendes i lodret retning. Da der ikke er nogen mekanisk vibration i AO-deflektoren, er højhastighedsscanning mulig, og observation i realtid på monitorskærmen er mulig. Kameraets høje hastighed er et meget vigtigt element, der direkte påvirker hastigheden af fokus og positionssøgning.
5. Forholdet mellem fokusposition og lysstyrke
I et konfokalt optisk system placeres prøven korrekt i fokuspositionen, når lysstyrken er zui stor, foran og bagved vil dens lysstyrke blive kraftigt reduceret (Figur 4 ubrudt linje). Denne følsomme selektivitet af brændplanet er princippet bag højdeorienteringen af det konfokale mikroskop og dybden af fokusudvidelsen. I modsætning hertil viser de sædvanlige optiske mikroskoper ikke nogen væsentlig ændring i lysstyrke før og efter fokuspositionen (stiplet linje i fig. 4).
6. Høj kontrast, høj opløsning
I et konventionelt optisk mikroskop interfererer det reflekterede lys fra den ufokuserede del af mikroskopet med og overlapper med den fokale billeddannende del af mikroskopet, hvilket resulterer i et fald i billedkontrasten. I modsætning hertil fjernes spredt lys uden for fokuspunktet og inde i objektivlinsen i et konfokalt optisk system næsten fuldstændigt, hvilket resulterer i billeder med meget høj kontrast. Desuden er mikroskopets opløsningsevne forbedret, fordi lyset passerer gennem objektivlinsen to gange, hvilket gør punktbilledet skarpere.
7. Optisk lokaliseringsfunktion
I det konfokale optiske system er det reflekterede lys afskærmet af mikroblænden i det andet punkt end brændpunktet. Som et resultat, når man observerer en tredimensionel prøve, dannes billedet, som om prøven var blevet skåret i skiver med fokuspunktet (fig. 5). Denne effekt kaldes optisk lokalisering og er en af funktionerne ved konfokale optiske systemer.
