Mikroskopisk direkte tællemetode for mikroorganismer
Direkte tælling ved hjælp af et hæmocytometer under et mikroskop er en almindelig metode til optælling af mikroorganismer. Denne metode har fordelene ved at være intuitiv og hurtig. En korrekt fortyndet bakteriesuspension (eller sporesuspension) anbringes i tællekammeret mellem hæmocytometerglasset og dækglasset til mikroskopisk tælling. Da volumen af tællekammeret er fast (0,1 mm³), kan det samlede antal mikroorganismer pr. volumenenhed beregnes ud fra antallet af mikroorganismer observeret under mikroskopet. Da denne metode tæller både levende og døde mikrobielle celler, er den også kendt som totaltællingsmetoden.
Et hæmocytometer er en speciel glasplade bestående af tre platforme dannet af fire riller. Den midterste platform er yderligere opdelt i to halvdele af en tværgående rille. Et gitter er ætset på hver halvdel af platformen. Hvert gitter er opdelt i ni store firkanter, og den centrale store firkant fungerer som tællekammer, hvor mikrobiel tælling udføres. Strukturen af hæmocytometeret er vist i figur Ⅷ‑1.
Der er to almindelige typer gradueringsspecifikationer for tællekamre. En type har en stor firkant opdelt i 16 mellemstore firkanter, og hver mellemstor firkant er yderligere opdelt i 25 små firkanter (figur Ⅷ‑2). Den anden type har en stor firkant opdelt i 25 mellemstore firkanter, og hver mellemstor firkant er opdelt i 16 små firkanter (Figur Ⅷ‑1C). Uanset tællekammerets specifikation forbliver det samlede antal små firkanter inden for hver stor firkant det samme: 16 × 25=400 små firkanter, som vist i figur Ⅷ‑2.
Hvert stort kvadrat har en sidelængde på 1 mm, hvilket giver et areal på 1 mm². Efter placering af dækglasset er højden mellem objektglas og dækglas 0,1
mm; derfor er tællekammerets volumen 0,1 mm³.
Til optælling tælles normalt det samlede antal mikroorganismer i fem mellemstore kvadrater. Gennemsnitsværdien for hvert mellemstor kvadrat beregnes derefter og ganges med 16 eller 25 for at opnå det samlede antal inden for et stort kvadrat. Til sidst omregnes denne værdi til det samlede antal mikroorganismer i 1 ml af bakteriesuspensionen.
