To almindeligt anvendte mikroskopiske observationsmetoder
1, Mørkefeltobservation
Mørkt synsfelt er faktisk mørkt feltbelysning Dens egenskaber er anderledes end lyst synsfelt, da det ikke direkte observerer det oplysende lys, men snarere observerer det reflekterede eller diffrakterede lys fra objektet, der inspiceres. Derfor bliver synsfeltet en mørk baggrund, mens objektet, der inspiceres, præsenterer et lyst billede
Princippet om mørkt felt er baseret på det optiske Tyndall-fænomen, hvor støvpartikler ikke kan observeres af det menneskelige øje, når de udsættes for stærkt lys på grund af diffraktion forårsaget af stærkt lys. Hvis lyset projiceres skråt på det, ser partiklerne ud til at øges i volumen på grund af lysreflektion, hvilket gør dem synlige for det menneskelige øje.
Det specielle tilbehør, der kræves til observation af mørke felter, er en spotlight i mørkt felt. Det kendetegner, at det ikke tillader lysstrålen at passere gennem objektet fra bund til top, men ændrer lysets bane, så det rettes skråt mod objektet, så belysningslyset ikke kommer direkte ind i objektivlinsen, og bruger det lyse billede, der dannes af refleksionen eller diffraktionen af lyset i det mørke objekt, der er meget højere i overfladen af det observerede lys, end det observerede lys på overfladen. feltobservation, der når op til 0,02-0,004
2, fasekontrast spejl inspektionsmetode
Den vellykkede opfindelse af fasekontrastmikroskopi i udviklingen af optiske mikroskoper er en vigtig bedrift inden for moderne mikroskopiteknologi. Vi ved, at det menneskelige øje kun kan skelne lysbølgernes bølgelængde (farve) og amplitude (lysstyrke). For farveløse og gennemsigtige biologiske prøver, når lys passerer igennem, ændres bølgelængden og amplituden ikke meget, hvilket gør det vanskeligt at observere prøven i et lyst felt
Fasekontrastmikroskopet bruger forskellen i den optiske vejlængde af det objekt, der inspiceres til spejlinspektion, og udnytter effektivt lysinterferensfænomenet til at transformere faseforskellen, der ikke kan skelnes af det menneskelige øje, til en skelnelig amplitudeforskel. Selv farveløse og gennemsigtige stoffer kan blive tydeligt synlige. Dette letter i høj grad observationen af levende celler, derfor er fasekontrastmikroskopi meget brugt i omvendte mikroskoper
Det grundlæggende princip for fasekontrastmikroskopi er at konvertere den optiske vejforskel af synligt lys, der passerer gennem prøven, til amplitudeforskel, og derved forbedre kontrasten mellem forskellige strukturer og gøre dem klare og synlige. Efter at have passeret gennem prøven gennemgår lyset brydning, afviger fra den oprindelige optiske vej og forsinkes med 1/4 λ (bølgelængde). Hvis den optiske vejforskel øges eller formindskes med yderligere 1/4 λ, bliver den optiske vejforskel 1/2 λ, og interferensen mellem de to lysstråler øges eller mindskes efter at aksen er kombineret, hvilket forbedrer kontrasten Strukturmæssigt har fasekontrastmikroskoper to
særlige forskelle fra almindelige optiske mikroskoper:
1. En ringformet membran er placeret mellem lyskilden og kondensatoren, og dens funktion er at danne en hul lyskegle, der passerer gennem kondensatoren og fokuserer på prøven
2. Vinkelfaseplade: En faseplade belagt med magnesiumfluorid tilsættes objektivlinsen, som kan forsinke fasen af direkte eller diffrakteret lys med 1/4 λ. Det kan opdeles i to typer:
(1). A+faseplade: Forsink det direkte lys med 1/4 λ, og tilføj de to sæt lysbølger efter at have kombineret akserne. Amplituden øges, og prøvestrukturen bliver lysere end det omgivende medium og danner en lys kontrast (eller negativ kontrast)
(2). B+faseplade: Forsink det diffrakterede lys med 1/4 λ, og subtraher lysbølgerne efter at have kombineret akserne af to sæt lysstråler, hvilket resulterer i et fald i amplitude og danner en mørk kontrast (eller positiv kontrast). Strukturen bliver mørkere end det omgivende medium
