Hvad er de særlige strukturelle komponenter i et fluorescerende mikroskop?
Farvefilterblokken er en vigtig del af et fluorescensmikroskop, og dets kernekomponenter består af et første barrierefilter til excitationslys, et andet barrierefilter til emissionslys og et stråleopdelingsspejl. Farvefiltermodellerne og navnene på forskellige producenter er ofte inkonsekvente.
1. Excitationslysfilter og emissionslysfilter: Baseret på egenskaberne af lyskilden og det fluorescerende pigment vælges de følgende tre typer af matchning sædvanligvis for at give excitationslys inden for et bestemt bølgelængdeområde og tillade fluorescensen exciteret af prøven at passere igennem og nå okularet til billeddannelse.
UV-excitation: Excitationslysfilteret kan tillade UV-lys at passere igennem og blokere synligt lys over 400 nm i at passere igennem. Det tilsvarende emissionslysfilter tillader blåt lys at passere igennem, og lyset i synsfeltet ser blåt ud, som når det påføres DAPI-farvning.
Blåt lys excitation: Excitationslysfilteret kan tillade blåt lys at passere igennem og blokere lys fra andre bølgelængder. Det tilsvarende emissionslysfilter tillader grønt lys at passere igennem, såsom GFP-farvningsmarkører.
Grønt lys excitation: Excitationslysfilteret tillader grønt lys at passere igennem og blokerer lys fra andre bølgelængder. Det tilsvarende emissionslysfilter tillader normalt rødt lys at passere igennem, såsom Rhodamine-farvning.
2. Semi-transparent og semi-reflekterende farvefilter: Dens funktion er fuldstændigt at blokere excitationslyset fra at passere igennem og reflektere det; Og udsender lys inden for det tilsvarende bølgelængdeområde. Dens model svarer til excitationslysfilteret og emissionslysfilteret.
(2) Objektivlinse og okular
Forskellige objektivlinser kan anvendes, men det er bedst at vælge linser med tilføjet skala og kromatisk aberrationsreduktion, da deres selvfluorescens er ekstremt lav, og deres lystransmissionsydelse (bølgelængdeområde) er velegnet til fluorescens. På grund af det faktum, at fluorescenslysstyrken af et billede i mikroskopfeltet er direkte proportional med kvadratet af blændeforholdet for objektivlinsen og omvendt proportional med dets forstørrelse, for at forbedre lysstyrken af fluorescensbilleder, bør en objektivlinse med et større blændeforhold anvendes. Specielt for prøver med utilstrækkelig fluorescens bør der anvendes en objektivlinse med et højt blændeforhold og høj lystransmission, ledsaget af et okular med den lavest mulige forstørrelse.
(3) Andre optiske anordninger
Det reflekterende lag af et spejl er normalt belagt med aluminium, fordi aluminium absorberer mindre ultraviolet og synligt lys i det blå lilla område, hvilket reflekterer over 90 % (mens sølv kun har en reflektionsevne på 70 %). Generelt bruges flade spejle. Fokuseringslinse, der er specielt designet og fremstillet til fluorescensmikroskoper, er lavet af kvartsglas eller andet glas, der transmitterer ultraviolet lys. Den faldende lysanordning er, udover at have funktionen som en transmissiv lyskilde, mere egnet til direkte observation af uigennemsigtige og halvgennemsigtige prøver, såsom tykke plader, filtermembraner, bakteriekolonier, vævskulturer og andre prøver. I de senere år er mange nye typer fluorescensmikroskoper blevet udviklet ved hjælp af en faldende lysanordning, kendt som et faldende lys fluorescensmikroskop.
(4) Lyskilde
I dag bruges højtryks-kviksølvlamper på 50 eller 100 W almindeligvis som lyskilder. Under drift sker der afladning mellem to elektroder, hvilket får kviksølv til at fordampe, og trykket inde i kuglen stiger hurtigt (denne proces tager normalt omkring 5-15 minutter). Under denne proces udsendes lyskvanter, og bølgelængden af det frigivne lys er tilstrækkelig til at excitere forskellige fluorescerende stoffer. Derfor er det meget brugt i fluorescensmikroskoper.
Levetiden for kviksølvlamper er relativt kort, normalt 200 timer. Som svar på denne begrænsning i levetiden er en ny type fluorescerende lyskilde X-Cite i de senere år blevet meget brugt med en super lang pærelevetid på 2000 timer og fleksibel brug - ingen forvarmning påkrævet, klar til brug.
