Hvad er forskellen mellem fluorescens og laser konfokal mikroskopi?
fluorescensmikroskop
1. Fluorescensmikroskop er en enhed, der bruger ultraviolet lys som lyskilde til at belyse objektet, der testes, hvilket får det til at udsende fluorescens og derefter observere objektets form og position under mikroskopet. Fluorescensmikroskopi bruges til at studere absorption, transport, distribution og lokalisering af stoffer i celler. Nogle stoffer i celler, såsom klorofyl, kan udsende fluorescens efter at være blevet udsat for ultraviolet stråling; Nogle stoffer udsender muligvis ikke selv fluorescens, men hvis de farves med fluorescerende farvestoffer eller fluorescerende antistoffer, kan de også udsende fluorescens under ultraviolet stråling. Fluorescensmikroskopi er et af værktøjerne til kvalitativ og kvantitativ forskning i disse stoffer.
2. Princip for fluorescensmikroskop:
(A) Lyskilde: Lyskilden udsender lys af forskellige bølgelængder (fra ultraviolet til infrarødt).
(B) Excitationsfilterlyskilde: Transmitterer lys med en specifik bølgelængde, der kan producere fluorescens i prøven, mens det blokerer lys, der er ubrugeligt til excitationsfluorescens.
(C) Fluorescerende prøver: generelt farvet med fluorescerende pigmenter.
(D) Blokerende filter: transmitterer selektivt fluorescens ved at blokere excitationslys, der ikke er blevet absorberet af prøven, og nogle bølgelængder transmitteres også selektivt i fluorescens. Et mikroskop, der bruger ultraviolet lys som lyskilde til at udsende fluorescens fra det bestrålede objekt. Elektronmikroskopet blev først samlet af Knorr og Harroska i Berlin, Tyskland i 1931. Denne type mikroskop bruger en højhastigheds elektronstråle i stedet for en lysstråle. På grund af elektronstrømmens meget kortere bølgelængde sammenlignet med lysbølger, kan forstørrelsen af elektronmikroskopet nå 800000 gange med en minimum opløsningsgrænse på 0,2 nanometer. Scanningselektronmikroskopet, som begyndte at blive brugt i 1963, giver folk mulighed for at se de små strukturer på overfladen af objekter.
3. Anvendelsesområde: Bruges til at forstørre billeder af små objekter. Anvendes generelt til observation af biologi, medicin, mikroskopiske partikler osv.
konfokalt mikroskop
1. Et konfokalt mikroskop tilføjer en semireflekterende linse til den reflekterede lysbane, som bøjer det reflekterede lys, der allerede er passeret gennem linsen, i andre retninger. Der er en baffel med et nålehul i brændpunktet, og det lille hul er placeret i brændpunktet. Bag baflen er et fotomultiplikatorrør. Man kan forestille sig, at det reflekterede lys før og efter detektionslysfokuspunktet ikke kan fokuseres på det lille hul gennem dette konfokale system og vil blive blokeret af baffelen. Så fotometeret måler intensiteten af reflekteret lys i brændpunktet.
2. Princip: Traditionelle optiske mikroskoper bruger feltlyskilder, og billedet af hvert punkt på prøven vil blive påvirket af diffraktion eller spredt lys fra tilstødende punkter; Laserscannende konfokalmikroskop bruger en laserstråle til at danne en punktlyskilde gennem et oplyst nålehul for at scanne hvert punkt i prøvens brændplan. Det belyste punkt på prøven afbildes ved detektionsnålhullet og modtages punkt for punkt eller linje af et fotomultiplikatorrør (PMT) eller en termoelektrisk koblingsenhed (cCCD) efter detektionsnålhullet, hvilket hurtigt danner et fluorescerende billede på computerskærmen skærmen. Belysningsnålehullet og detektionsnålehullet er konjugeret i forhold til objektivlinsens brændplan. Punkterne på brændplanet er samtidigt fokuseret på belysningsnålehullet og emissionsnålehullet, og punkter uden for brændplanet vil ikke blive afbildet ved detektionsnålehullet. Dette resulterer i et konfokalt billede, der repræsenterer det optiske tværsnit af prøven, hvilket overvinder ulempen ved slørede billeder i konventionel mikroskopi.
3. Anvendelsesområder: involverer medicin, dyre- og planteforskning, biokemi, bakteriologi, cellebiologi, væv og embryo, fødevarevidenskab, genetik, farmakologi, fysiologi, optik, patologi, botanik, neurovidenskab, havbiologi, materialevidenskab, elektronisk videnskab, mekanik, petroleumsgeologi og mineralogi.
